強(qiáng)脈沖光對(duì)大鼠皮膚膠原、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1的影響研究.pdf

1、背景： 細(xì)胞外基質(zhì)降解、膠原斷裂是皮膚光老化最核心的問題。因此，任何保持基質(zhì)膠原連續(xù)完整或促進(jìn)基質(zhì)膠原增生的措施都可能有助于防治紫外線的皮膚光損害或達(dá)到治療光老化的目的。細(xì)胞外基質(zhì)中最主要的成分是真皮中的Ⅰ型膠原。而轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)在細(xì)胞外基質(zhì)膠原生物合成中扮演重要角色。 目的： 觀察并定量研究強(qiáng)脈沖光照射后Sprague Dawley(SD)大鼠皮膚膠原含量的變化及其隨時(shí)間的變化規(guī)律；同時(shí)對(duì)S

2、D大鼠皮膚TGF-β1的分布及強(qiáng)脈沖光照射后TGF-β1的變化趨勢(shì)進(jìn)行觀察，以進(jìn)一步闡明強(qiáng)脈沖光治療皮膚光老化的機(jī)制。 方法： 選取15只SD大鼠，兩側(cè)背部皮膚去毛，隨機(jī)選取一側(cè)皮膚為強(qiáng)脈沖光照射實(shí)驗(yàn)組，對(duì)側(cè)背部皮膚作對(duì)照組。采用波長(zhǎng)560-1200nm，能量密度27J/c㎡，脈寬3.0ms，雙脈沖方式，脈沖延時(shí)10ms強(qiáng)脈沖光照射實(shí)驗(yàn)組皮膚，并分別于術(shù)后1天、1周、2周、3周、4周、6周、8周對(duì)實(shí)驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)皮膚取材，

3、進(jìn)行HE常規(guī)染色、Van Gieson膠原特殊染色和Masson三色染色。觀察對(duì)比實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組皮膚表皮、真皮膠原形態(tài)以及成纖維細(xì)胞數(shù)量變化，并作皮膚真皮Ⅰ型膠原蛋白免疫組化染色，圖像半定量分析不同時(shí)間點(diǎn)上膠原含量。同時(shí)，作大鼠皮膚轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β1蛋白的免疫組化染色定位，觀察大鼠皮膚TGF-β1的分布情況以及強(qiáng)脈沖光照射后TGF-β1隨時(shí)間變化規(guī)律。 結(jié)果： 1、HE染色、膠原特殊染色觀察，強(qiáng)脈沖光照射前正常大鼠

4、皮膚真皮膠原纖細(xì)、稀疏，排列紊亂，成纖維細(xì)胞數(shù)目較少。強(qiáng)脈沖光照射術(shù)后2周、3周、4周、6周和8周時(shí)實(shí)驗(yàn)組大鼠皮膚比照對(duì)照組，真皮膠原有較明顯的增生。膠原沉積的部位主要在大鼠真皮淺層，表現(xiàn)為真皮淺層膠原明顯增厚，膠原粗大，新生膠原順序重排，走向較一致，并大致與表皮方向平行，成纖維細(xì)胞增多。但皮膚深層膠原、照射后2周前的真皮淺層膠原形態(tài)、排序變化較對(duì)照組無明顯差異。術(shù)前術(shù)后皮膚表皮形態(tài)未見明顯變化。 2、強(qiáng)脈沖光照射后真皮淺層Ⅰ型

5、膠原蛋白免疫組化圖像半定量分析測(cè)定，結(jié)果強(qiáng)脈沖光照射實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較Ⅰ型膠原蛋白含量均高于對(duì)照組(P<0.001)。重復(fù)測(cè)量方差分析說明實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較膠原增生隨時(shí)間變化的趨勢(shì)明顯不同(F=3483，P<0.001)，不同時(shí)間點(diǎn)上膠原光密度值不同(F=296.3，P<0.001)，兩兩均數(shù)比較除6周和8周之間均有明顯差異(P<0.5)。實(shí)驗(yàn)組強(qiáng)脈沖光照射后，大鼠皮膚真皮淺層膠原增生自2周起隨時(shí)間逐漸增強(qiáng)，至4周達(dá)到最大值，后稍有下降

6、。 3、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β1分布于大鼠正常皮膚全層，主要分布在細(xì)胞外結(jié)締組織基質(zhì)膠原纖維中。皮膚上皮細(xì)胞、附屬器毛囊上皮、皮脂腺分泌細(xì)胞等亦有較弱陽(yáng)性表達(dá)。強(qiáng)脈沖光照射刺激大鼠皮膚分泌轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β1，實(shí)驗(yàn)組TGF-β1表達(dá)較對(duì)照組顯著增強(qiáng)，同樣，陽(yáng)性產(chǎn)物主要分布在細(xì)胞外結(jié)締組織中。真皮淺層、毛囊周圍基質(zhì)中較對(duì)照組有非常強(qiáng)烈的棕黃色著染，同時(shí)皮膚表皮細(xì)胞亦出現(xiàn)明顯的陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物。陽(yáng)性表達(dá)區(qū)成纖維細(xì)胞數(shù)量明顯增多。TG