轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1對(duì)大鼠心臟成纖維細(xì)胞膠原和α-輔肌動(dòng)蛋白-2的房室差異表達(dá)研究.pdf

1、目的:觀察轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1對(duì)大鼠心臟成纖維細(xì)胞膠原蛋白和α-輔肌動(dòng)蛋白-2在心房、心室表達(dá)的差異，并探討其形成的分子機(jī)制。
　　方法：組織貼塊法原代培養(yǎng)大鼠心房、心室成纖維細(xì)胞，經(jīng)SA BC免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法鑒定細(xì)胞后，分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)（1）應(yīng)用羥脯氨酸消化法觀察不同濃度TGF-β1（0、5、10ng/ml）及不同作用時(shí)間（6h、12h、24h、48h）對(duì)心房、心室成纖維細(xì)胞羥脯氨酸含量的影響;（2）用篩選的TGF-β1最佳干

2、預(yù)濃度及作用時(shí)間分別刺激心房、心室成纖維細(xì)胞后，羥脯氨酸法比較兩種細(xì)胞的培養(yǎng)液中羥脯氨酸的含量，RT-PCR比較兩種細(xì)胞Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白、α-輔肌動(dòng)蛋白-2的mRNA表達(dá)，蛋白質(zhì)印跡法比較二者α-輔肌動(dòng)蛋白-2，Smad2/3、p-Smad2/3及Smad7蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）TGF-β1對(duì)大鼠心房、心室成纖維細(xì)胞均具有促進(jìn)膠原蛋白合成的作用，當(dāng)TGF-β1刺激條件為5ng/ml，24h時(shí)作用最強(qiáng)。（2）用上述條件TGF

3、-β1分別刺激心房、心室成纖維細(xì)胞，心室成纖維細(xì)胞刺激干預(yù)組I、III型膠原mRNA及蛋白的表達(dá)較同期培養(yǎng)未刺激對(duì)照組稍增加，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；心房成纖維細(xì)胞刺激干預(yù)組中I、III型膠原mRNA及蛋白的表達(dá)較同期培養(yǎng)未刺激對(duì)照組顯著升高（P＜0.01）；心房成纖維細(xì)胞刺激干預(yù)組與心室成纖維細(xì)胞刺激干預(yù)組相比，前者I、III型膠原mRNA及蛋白表達(dá)的增加更明顯，差異有意義（P＜0.01）。（3）心室、心房成纖維細(xì)胞TGF-β1刺激干預(yù)組

4、α-輔肌動(dòng)蛋白-2 mRNA及蛋白的表達(dá)較同期培養(yǎng)對(duì)照組均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與心室成纖維細(xì)胞TGF-β1刺激干預(yù)組相比，心房成纖維細(xì)胞TGF-β1刺激干預(yù)組α-輔肌動(dòng)蛋白-2 mRNA及蛋白表達(dá)進(jìn)一步升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（4）心室成纖維細(xì)胞TGF-β1刺激干預(yù)組Smad2/3、p-Smad2/3蛋白水平較同期培養(yǎng)對(duì)照組稍增加，Smad7蛋白水平稍降低，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；心房成纖維細(xì)胞TGF-β1

5、刺激干預(yù)組Smad2/3表達(dá)的增加無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p-Smad2/3蛋白水平較同期培養(yǎng)對(duì)照組明顯增加，Smad7蛋白水平明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與心室成纖維細(xì)胞TGF-β1刺激干預(yù)組相比，心房成纖維細(xì)胞TGF-β1刺激干預(yù)組p-Smad2/3蛋白表達(dá)的升高，Smad7蛋白表達(dá)的降低更顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論：1.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1可能既引起心臟成纖維細(xì)胞膠原代謝異常，又引起細(xì)胞骨架蛋白