轉化生長因子-β1對大鼠心臟成纖維細胞膠原和α-輔肌動蛋白-2的房室差異表達研究.pdf

1、目的:觀察轉化生長因子-β1對大鼠心臟成纖維細胞膠原蛋白和α-輔肌動蛋白-2在心房、心室表達的差異，并探討其形成的分子機制。
　　方法：組織貼塊法原代培養(yǎng)大鼠心房、心室成纖維細胞，經(jīng)SA BC免疫細胞化學染色方法鑒定細胞后，分別進行以下實驗（1）應用羥脯氨酸消化法觀察不同濃度TGF-β1（0、5、10ng/ml）及不同作用時間（6h、12h、24h、48h）對心房、心室成纖維細胞羥脯氨酸含量的影響;（2）用篩選的TGF-β1最佳干

2、預濃度及作用時間分別刺激心房、心室成纖維細胞后，羥脯氨酸法比較兩種細胞的培養(yǎng)液中羥脯氨酸的含量，RT-PCR比較兩種細胞Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白、α-輔肌動蛋白-2的mRNA表達，蛋白質印跡法比較二者α-輔肌動蛋白-2，Smad2/3、p-Smad2/3及Smad7蛋白的表達。
　　結果：（1）TGF-β1對大鼠心房、心室成纖維細胞均具有促進膠原蛋白合成的作用，當TGF-β1刺激條件為5ng/ml，24h時作用最強。（2）用上述條件TGF

3、-β1分別刺激心房、心室成纖維細胞，心室成纖維細胞刺激干預組I、III型膠原mRNA及蛋白的表達較同期培養(yǎng)未刺激對照組稍增加，但差異無統(tǒng)計學意義；心房成纖維細胞刺激干預組中I、III型膠原mRNA及蛋白的表達較同期培養(yǎng)未刺激對照組顯著升高（P＜0.01）；心房成纖維細胞刺激干預組與心室成纖維細胞刺激干預組相比，前者I、III型膠原mRNA及蛋白表達的增加更明顯，差異有意義（P＜0.01）。（3）心室、心房成纖維細胞TGF-β1刺激干預組

4、α-輔肌動蛋白-2 mRNA及蛋白的表達較同期培養(yǎng)對照組均增高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與心室成纖維細胞TGF-β1刺激干預組相比，心房成纖維細胞TGF-β1刺激干預組α-輔肌動蛋白-2 mRNA及蛋白表達進一步升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。（4）心室成纖維細胞TGF-β1刺激干預組Smad2/3、p-Smad2/3蛋白水平較同期培養(yǎng)對照組稍增加，Smad7蛋白水平稍降低，差異無統(tǒng)計學意義；心房成纖維細胞TGF-β1

5、刺激干預組Smad2/3表達的增加無統(tǒng)計學意義，p-Smad2/3蛋白水平較同期培養(yǎng)對照組明顯增加，Smad7蛋白水平明顯減少，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與心室成纖維細胞TGF-β1刺激干預組相比，心房成纖維細胞TGF-β1刺激干預組p-Smad2/3蛋白表達的升高，Smad7蛋白表達的降低更顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　結論：1.轉化生長因子-β1可能既引起心臟成纖維細胞膠原代謝異常，又引起細胞骨架蛋白