轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β-,2-對(duì)體外培養(yǎng)豚鼠鞏膜成纖維細(xì)胞的影響.pdf

1、研究近視發(fā)病機(jī)制對(duì)于防止各種致盲性并發(fā)癥和探索近視的康復(fù)手段都具有極其重要的意義。國(guó)內(nèi)外對(duì)哺乳類(lèi)動(dòng)物近視眼模型的研究已經(jīng)表明鞏膜的病理性改變表現(xiàn)為：細(xì)胞成分減少，細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)的改變等。這些是導(dǎo)致眼軸增長(zhǎng)和近視性屈光改變的重要原因。大量的近視眼相關(guān)研究提示近視的發(fā)生是在異常視覺(jué)信息的作用下，視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜內(nèi)多種神經(jīng)遞質(zhì)和生長(zhǎng)因子的表達(dá)發(fā)生改變，通過(guò)一些系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程使鞏膜成纖維細(xì)胞的增生、代謝和細(xì)胞外基質(zhì)發(fā)生改變。已有多種物質(zhì)被證明可

2、能參與這一信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，如多巴胺，乙酰膽堿，一氧化氮等。但是研究者們推測(cè)，上述因子并不是直接作用于鞏膜細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)，而是在異常視覺(jué)信息導(dǎo)致鞏膜病理性改變的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中的上游信號(hào)分子，它們通過(guò)某種特定的因子發(fā)揮著對(duì)鞏膜的終端調(diào)控作用。因此，尋找和確定調(diào)控鞏膜改變的生物活性物質(zhì)，并同時(shí)明確其作用機(jī)制是近視研究中的一個(gè)關(guān)鍵內(nèi)容。 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforminggrowthfactor-β，TGF-β)是一類(lèi)多功能的調(diào)節(jié)細(xì)

3、胞生長(zhǎng)、分化的細(xì)胞因子。人體內(nèi)存在TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3三種形式，它們具有相似的生物學(xué)作用。TGF-β剛分泌時(shí)處于“潛活”狀態(tài)，在一定條件下被激活并發(fā)揮生物學(xué)作用。TGF-β對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化具有雙向調(diào)節(jié)作用，其作用與細(xì)胞類(lèi)型、來(lái)源等有關(guān)。TGF-β還參與損傷修復(fù)、免疫反應(yīng)、胚胎發(fā)育等重要的病理、生理過(guò)程晴[50]，亦是細(xì)胞外基質(zhì)的有效調(diào)節(jié)因子，可增強(qiáng)膠原等的合成，而減少基質(zhì)的降解，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。TGF-β相應(yīng)

4、受體有三種，稱(chēng)為T(mén)βRI、TβRⅡ、TβRⅢ，其中Ⅰ、Ⅱ型受體是參與信息傳遞的主要分子，TpRill的功能目前尚不明確，可能也是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的組成部分[51]。2004年Jobling等[29]研究發(fā)現(xiàn)，哺乳類(lèi)動(dòng)物近視眼模型鞏膜中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β2的表達(dá)顯著下降，提示轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β2可能是引起鞏膜重塑的直接因子。本實(shí)就TGF-β2對(duì)體外培養(yǎng)豚鼠鞏膜成纖維細(xì)胞(Guineapigscleralfibroblasts，GSF)的影響作一實(shí)驗(yàn)研

5、究，從而探討TGF-β2與近視發(fā)生機(jī)制的關(guān)系。 材料與方法 隨機(jī)選取健康三色出生1～3天的豚鼠，雌雄兼用，體重80～120克。體外培養(yǎng)GSF，依次進(jìn)行原代GSF的形態(tài)學(xué)觀察，GSF的鑒定，免疫組化檢測(cè)MMP-2(matrixmetalloproteinase-2)／TIMP-2(tissueinhibitorofmetalloproteinase-2)的表達(dá)情況。取第3～6代的細(xì)胞進(jìn)行藥物實(shí)驗(yàn)，觀察TGF-β2對(duì)體外培養(yǎng)

6、GSF增生的時(shí)間、劑量效應(yīng)關(guān)系，對(duì)膠原合成的影響以及對(duì)MMP-2／TIMP-2表達(dá)的劑量效應(yīng)關(guān)系。 結(jié)果 1．GSF鑒定陽(yáng)性，體外培養(yǎng)GSF正常情況下表達(dá)MMP-2／TIMP-2，原代、傳代培養(yǎng)生長(zhǎng)情況良好，凍存復(fù)蘇后在倒置顯微鏡下觀察形態(tài)與凍存前無(wú)明顯差異。 2．與對(duì)照組相比TGF-β2在O．01ng．ml-1～lO．OOng．ml-1濃度范圍內(nèi)與GSF的增生呈劑量效應(yīng)關(guān)系(P＜O．05)，并以10．OOng．

7、ml-1濃度時(shí)促進(jìn)增生作用最顯著(P＜0．01)，濃度再增加，其促進(jìn)增生作用反而略有減弱。 3．從第2天開(kāi)始試驗(yàn)組和對(duì)照組相比較TGF-β2對(duì)鞏膜成纖維細(xì)胞有顯著的促增生作用(P＜O．05)。 4．與對(duì)照組相比較濃度為0．1ng．ml-1～50．OOng．ml-1的TGF-β2能有效刺激鞏膜成纖維細(xì)胞膠原蛋白合成，并呈劑量效應(yīng)關(guān)系，當(dāng)濃度為50．OOng．ml-1時(shí)，作用達(dá)到飽和 5．TGF-β2在1．OOng．

8、ml-1時(shí)上清液中MMP一2的含量與對(duì)照組相比明顯降低(P＜0．05)，在10．OOng．m1-1-50．OOng．ml-1時(shí)下降更為明顯(P＜0．01)。而TIMP-2則在O．01ng．m1-1～50．OOng．ml-1范圍內(nèi)隨著濃度的增加上清液中的含量沒(méi)有明顯改變。 結(jié)論 1．TGF-β2可以顯著的促進(jìn)GSF增生，并呈時(shí)間劑量效應(yīng)依賴(lài)關(guān)系。 2．TGF-β2一定濃度范圍內(nèi)隨著濃度的增加能有效刺激鞏膜成纖維細(xì)胞