堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子與膠原對(duì)組織工程軟骨體外構(gòu)建的影響.pdf

1、　　目的：①在單層培養(yǎng)系統(tǒng)中評(píng)價(jià)堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)對(duì)兔生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞增殖和分化的作用。并篩選其用于體外軟骨組織成團(tuán)培養(yǎng)的最佳濃度：②以成團(tuán)培養(yǎng)(pellet culture)為培養(yǎng)系統(tǒng)，以兔生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞為種子細(xì)胞，探討bFGF與基質(zhì)膠原單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)體外軟骨組織構(gòu)建的影響，探索構(gòu)建組織工程軟骨的最佳條件。
　　方法：①分離并單層培養(yǎng)兔生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞，添加不同濃度的bFGF。②采用WST-8染色法檢測(cè)細(xì)胞增殖倍數(shù)

2、；甲苯胺藍(lán)染色，觀察軟骨細(xì)胞外基質(zhì)酸性粘多糖的分泌；羥脯氨酸法和阿新藍(lán)(Alcian Blue)法測(cè)定基質(zhì)產(chǎn)量；酶動(dòng)力學(xué)方法測(cè)定堿性磷酸酶(ALP)活性。③離心后三維成團(tuán)培養(yǎng)兔生長(zhǎng)板軟骨細(xì)胞，并根據(jù)第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果添加適量的bFGF和膠原。④HE染色，觀察新生軟骨組織形態(tài)；免疫組化檢測(cè)Ⅰ型和Ⅱ型膠原表達(dá)；Hoechst33258染色，檢測(cè)新生軟骨組織中DNA含量；甲苯胺藍(lán)染色，觀察軟骨細(xì)胞外基質(zhì)酸性粘多糖的分泌；羥脯氨酸法與阿新藍(lán)(Al