轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1對(duì)支氣管哮喘患者肺成纖維細(xì)胞的作用研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)對(duì)支氣管哮喘患者肺成纖維細(xì)胞增殖和分泌的影響，探討二者在支氣管哮喘氣道重塑中的作用和關(guān)系。
　　 方法：采用組織塊貼壁法和酶消化法，分離和原代培養(yǎng)支氣管哮喘患者肺成纖維細(xì)胞，免疫熒光法進(jìn)行鑒定。0μg/L TGF-β1濃度（對(duì)照組）、1μg/L TGF-β1濃度(A組)、5μg/L TGF-β1濃度（B組）、10μg/L TGF-β1濃度（C組）分別作用肺成纖維細(xì)胞48h，MTT法測(cè)

2、定成纖維細(xì)胞增殖水平，Westrn blot檢測(cè)α-SMA蛋白的表達(dá)，RT-PCR法分別測(cè)定在以上不同TGF-β1濃度作用48h下，肺成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原(CollagenⅠ)和Ⅲ型膠原(CollagenⅢ)的mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：組織塊貼壁法成功地培養(yǎng)出了肺成纖維細(xì)胞，酶消化法未能成功。組織塊接種第6d時(shí)有少量細(xì)胞于其周?chē)莱?，呈長(zhǎng)梭形或者三角形，約25d細(xì)胞鋪滿(mǎn)瓶底，用自然純化和差速貼壁法純化細(xì)胞，胰酶消化法傳代培養(yǎng)

3、，并且可以進(jìn)行凍存與復(fù)蘇。免疫熒光法鑒定原代培養(yǎng)出的細(xì)胞，成纖維細(xì)胞因表達(dá)波形蛋白而染成綠色，證明該實(shí)驗(yàn)研究的細(xì)胞為肺成纖維細(xì)胞。MTT法檢測(cè)結(jié)果示:不同濃度的TGF-β1均可刺激哮喘患者肺成纖維細(xì)胞增殖，呈濃度依賴(lài)性(P＜0.05)。Weternblot結(jié)果顯示:不同濃度的TGF-β1作用下，成纖維細(xì)胞可表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)，其表達(dá)水平與TGF-β1呈明顯的濃度依賴(lài)關(guān)系(P＜0.05)。RT-PCR法檢測(cè)結(jié)果示:在不同

4、濃度的TGF-β1誘導(dǎo)下，成纖維細(xì)胞CollagenⅠ mRNA和CollagenⅢ mRNA的表達(dá)水平表達(dá)上調(diào)，均隨著TGF-β1的濃度增高而增高，呈濃度依賴(lài)性(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：組織塊貼壁法是一種較為可靠的肺成纖維細(xì)胞分離和原代培養(yǎng)方法。在支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制中，TGF-β1可促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)其向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化而被激活，合成和分泌CollagenⅠ和CollagenⅢ，從而引起支氣管哮喘患者氣道粘膜下