轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1與支氣管哮喘及哮喘相關(guān)表型關(guān)系的研究.pdf

1、哮喘是多基因參與的具有遺傳易感性的一組臨床綜合癥，受到基因-基因、基因-環(huán)境交互作用的影響。哮喘的兩大特征是氣道慢性非特異性炎癥和氣道重塑，臨床上以血清IgE增高、肺組織嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、黏膜高分泌和氣道高反應(yīng)為主要表現(xiàn)。盡管對(duì)這一復(fù)雜疾病有了一定了解，但其具體發(fā)病機(jī)制仍不清楚。 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(ttroisforming growth factor-β1，TGF-β1)是一種多功能細(xì)胞因子，具有抗炎和促炎雙重作用而參與哮喘氣

2、道炎癥與免疫應(yīng)答。另外，TGF-β1又因其獨(dú)特的促纖維化作用而參與哮喘的氣道重塑，因而與哮喘的關(guān)系十分密切。但是TGF-β1在哮喘發(fā)生發(fā)展中究竟扮演怎樣的角色，各家意見(jiàn)不一，有必要對(duì)其進(jìn)一步深入研究。 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)在維持免疫穩(wěn)態(tài)中有重要作用，其表面分子膜型TGF-β1在介導(dǎo)細(xì)胞接觸免疫抑制機(jī)制中發(fā)揮極其重要的作用。關(guān)于CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表面膜型TGF-β1的表達(dá)與哮喘及哮喘相關(guān)表型的關(guān)系

3、尚未見(jiàn)報(bào)道。 做為哮喘的候選基因，TGF-β1單核苷酸基因多態(tài)性(singlenucleotide polymorphism，SNP)與哮喘及其相關(guān)表型的關(guān)系被廣泛研究，但是不同的研究其結(jié)果并不一致甚至截然相反。目前尚無(wú)關(guān)于中國(guó)東南部漢族人群TGF-β1SNP/單倍型以及和其他基因交互作用對(duì)哮喘發(fā)病危險(xiǎn)度影響的報(bào)道，也尚無(wú)TGF-β1SNP/單倍型與哮喘臨床表型相關(guān)性研究的報(bào)道。 鑒于此，本研究將從這幾方面入手，揭示TG

4、F-β1與哮喘及哮喘相關(guān)表型的關(guān)系，進(jìn)一步闡明TGF-β1在哮喘發(fā)生發(fā)展中的作用。 第一部分膜型TGF-β1和其他表面標(biāo)志在過(guò)敏性哮喘患者外周血CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞上的表達(dá)以及吸入激素對(duì)其的影響 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)能通過(guò)其表面分子如TGF-β1、細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4(CTLA-4)和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子受體家族相關(guān)蛋白(GITR)發(fā)揮細(xì)胞-細(xì)胞接觸性免疫抑制，但是對(duì)T

5、reg在哮喘發(fā)病機(jī)制中的確切作用仍知之甚少。 目的：比較過(guò)敏性哮喘患者和正常人外周血Treg表面分子表達(dá)之間的差異，以及吸入激素對(duì)其的影響，同時(shí)分析這些表面分子表達(dá)與哮喘表型的相關(guān)性。 方法：用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CD4+CD25high Treg表面分子的表達(dá)。體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)觀察吸入激素對(duì)Treg表面分子表達(dá)的影響。血漿總IgE和超敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)分別用ELISA和乳膠增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定。 結(jié)果：急性期乖

6、穩(wěn)定期過(guò)敏性哮喘患者外周血Treg的數(shù)量與正常人相似。與CD4+CD25-T細(xì)胞相比，Treg優(yōu)先表達(dá)TGF-β1/LAP、CTLA-4、GITR、TLR4和FOXP3。急性生期哮喘患者的CD4+CD25highLAP+T細(xì)胞數(shù)量較穩(wěn)定期患者和正常人顯著減少。吸入激素治療可使CD4+CD25highLAP+T細(xì)胞比例增加，在體外受激素刺激后能增殖并呈劑量依賴(lài)關(guān)系。另外，CD4+CD25highLAP+T細(xì)胞比例與哮喘患者血漿總IgE及哮

7、喘嚴(yán)重度分級(jí)呈負(fù)相關(guān)，與FEV1％呈正相關(guān)。 結(jié)論：結(jié)果顯示膜型TGF-β1可能是一個(gè)預(yù)測(cè)哮喘嚴(yán)重度的有效指標(biāo)，并且可能與哮喘持續(xù)緩解有關(guān)。針對(duì)Treg表面分子(尤其是TGF-β1)的策略可能是將來(lái)哮喘治療有希望的手段。 第二部分TGF-β1單核苷酸多態(tài)性與哮喘易感性的關(guān)系以及和CD14之間的交互作用 哮喘是多基因控制的具有遺傳易感性的疾病。TGF-β1是哮喘候選基因之一，雖然有不少關(guān)于TGF-β1單核苷酸多態(tài)性

8、(SNP)與哮喘易感性的相關(guān)性研究，但是結(jié)果卻很不一致。 目的：研究在中國(guó)東南部漢族人群中TGF-β1 SNP/單倍型與哮喘發(fā)病危險(xiǎn)性的關(guān)系，以及TGF-β1與CD14之間的基因-基因交互作用對(duì)哮喘易感性的影響。 方法：連續(xù)性招募318名哮喘患者和352名正常志愿者。挑選TGF-β1三個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)rs1800469、rs1982073和rs12983047，CD14一個(gè)位點(diǎn)rs2563298，采用SNPstream(R)

9、和TaqMan(R)SNP分型法進(jìn)行基因分型。通過(guò)病例-對(duì)照設(shè)計(jì)分析這些位點(diǎn)和哮喘易感性的關(guān)系，以及TGF-β1與CD14之間的基因-基因交互作用。 結(jié)果：TGF-β1三個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)以及CD14的一個(gè)位點(diǎn)的等位基因、基因型頻率在哮喘組和對(duì)照組中沒(méi)有差別。TGF-β1單倍型分析與哮喘的發(fā)病危險(xiǎn)度也無(wú)相關(guān)性。TGF-βrs1800469和CD14 rs2563298之間有強(qiáng)烈的交互作用(校正OR=8.23，95％CI=2.68-25

10、.30)，同時(shí)攜帶TGF-β1 rs1800469 TT和CD14 rs2563298 CA/AA基因的人群發(fā)生哮喘的危險(xiǎn)性要比同時(shí)攜帶TGF-β1 rs1800469 TT和CD14rs2563298 CC者低81％(校正OR=0.19.95％CI=0.07-0.55)。rs1982073和rs1800469之間高度連鎖(D’=1.99)，因而與CD14rs2563298之間也有相等強(qiáng)度的交互作用。 結(jié)論：中國(guó)東南部漢族人群中

11、，TGF-β1單核苷酸基因多態(tài)性單獨(dú)與哮喘易感性無(wú)相關(guān)性，但和CD14之間存在交互作用，共同影響哮喘的發(fā)生。這對(duì)篩選哮喘高危人群和哮喘的預(yù)防有重要意義。 第三部分TGF-β1單核苷酸多態(tài)性與哮喘相關(guān)表型的關(guān)系 雖然在中國(guó)東南部漢族人群中，TGF-β1單核苷酸基因多態(tài)性與哮喘易感性無(wú)相關(guān)性(見(jiàn)第二部分)，但是有部分研究顯示TGF-β1單核苷酸多態(tài)性與哮喘的一些臨床表型相關(guān)。 目的：探討TGF-β1 SNP與中國(guó)東南部漢

12、族哮喘患者外周血CD4+CD25highLAP+T細(xì)胞比例、血漿總IgE、血漿TGF-β1、外周血嗜酸性粒細(xì)胞、肺功能、過(guò)敏原皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)(SPT)及哮喘嚴(yán)重度分級(jí)的關(guān)系。 方法：連續(xù)性招募318名哮喘患者。挑選TGF-β1三個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)rs 1800469、rs1982073和rs12983047，采用SNPstream(R)和TaqMan(R) SNP分型法進(jìn)行基因分型。CD4+CD25high曲LAP+T細(xì)胞比例用流式細(xì)胞

13、技術(shù)檢測(cè)，血漿總IgE和TGF-β1水平采用ELISA測(cè)定。通過(guò)單純病例設(shè)計(jì)分析TGF-β1 SNP和哮喘相關(guān)臨床表型的關(guān)系。 結(jié)果：和TT或TC基因型相比，攜帶rs1800469 CC基因型的哮喘患者外周血CD4+CD25highLAP+T細(xì)胞比例明顯增高(P<0.001)。同樣，攜帶rs1982073 TT基因型的哮喘患者該細(xì)胞群的比例較CC和CT者高(P<0.001)。rsl2983047 AG/GG攜帶者的FEV1/FV