轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1致成纖維細(xì)胞thy-1，Caveolin-1表達(dá)的改變及其在肺纖維化中的意義.pdf

1、小窩蛋白1即caveolin-1，是細(xì)胞表面的穴樣內(nèi)陷(caveolae)家族的最重要的一員，具有多種生物學(xué)功能。最近研究提示caveolin-1與肺纖維化關(guān)系密切。成纖維細(xì)胞是肺纖維化主要的生物合成細(xì)胞，近年來(lái)的研究表明，成纖維細(xì)胞是一個(gè)異質(zhì)性的群體，根據(jù)細(xì)胞表面蛋白thy-1可以將成纖維細(xì)胞分為thy-1+和thy-1-兩個(gè)亞組，兩亞組在諸多方面具有不同的特性，但是兩個(gè)亞組caveolin-1蛋白的表達(dá)是否相同目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)導(dǎo)。本

2、研究目的是從體外方法研究NIH/3T3成纖維細(xì)胞在致纖維化因子的刺激下caveolin-1表達(dá)水平的變化以及不同亞組caveolin-1表達(dá)的差異。博來(lái)霉素是肺纖維化模型是經(jīng)典的模型，我們同時(shí)檢測(cè)了博來(lái)霉素致纖維化不同時(shí)期caveolin-1表達(dá)的變化，初步探討了caveolin-1在肺纖維化動(dòng)物模型中的變化意義。 材料與方法： 一、材料：NIH3T3成纖維細(xì)胞株、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1、caveolin-1抗體、thy-1抗

3、體、DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、wistar大鼠 二、方法：流式細(xì)胞術(shù)、熒光激活細(xì)胞分選技術(shù)、免疫印跡技術(shù)、免疫組化技術(shù)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、TGF-betal能夠?qū)е鲁衫w維細(xì)胞caveolin-1蛋白表達(dá)水平下降，并呈時(shí)間和劑量依賴性。 2、TGF-beta1并不能導(dǎo)致NIH3T3成纖維細(xì)胞thy-1表型改變。 3、Thy-1+亞組較thy-1-亞組caveolin-1表達(dá)水平明顯升高。 4

4、、隨著纖維化進(jìn)展，caveolin-1表達(dá)水平呈下降趨勢(shì)。 討論： 肺纖維化是一種進(jìn)展性、致死性的疾病。成纖維細(xì)胞是主要的生物合成細(xì)胞，具有異質(zhì)性。根據(jù)表面蛋白thy-1利用熒光激活細(xì)胞分選技術(shù)將成纖維細(xì)胞分為thy-1+和thy-1-亞組，可以更深入的了解成纖維細(xì)胞的功能和特性。Cav-1是細(xì)胞表面穴樣內(nèi)陷的重要組成部分，參與了多個(gè)系統(tǒng)、多種疾病的發(fā)生發(fā)展。我們首次探討了兩亞組cav-1表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)thy-1-亞組高

5、于thy-1+亞組，初步推測(cè)thy-1-亞組對(duì)于致纖維化因子的高反應(yīng)性可能與cav-1的低表達(dá)有關(guān)，進(jìn)一步的驗(yàn)證可以通過(guò)siRNA或者腺病毒轉(zhuǎn)染的方法驗(yàn)證。成纖維細(xì)胞的異質(zhì)性不僅表現(xiàn)在不同亞組對(duì)不同刺激反應(yīng)性不同，而且不同部位、不同疾病的成纖維細(xì)胞thy-1表達(dá)本身也有所不同。氣管內(nèi)滴注博來(lái)霉素是肺纖維化的經(jīng)典模型，通過(guò)免疫組化對(duì)肺纖維化模型不同時(shí)期cav-1的變化做了初步的探討，表明肺纖維化的進(jìn)展中同樣伴隨了cav-1的表達(dá)變化，進(jìn)一