PAI-1-RNAi對(duì)SD大鼠瘢痕組織及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1的影響.pdf

1、目的:瘢痕疙瘩(keloid)是由于皮膚受到損傷后在傷口愈合過(guò)程中成纖維細(xì)胞的過(guò)度增殖和細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrixc，ECM)在傷口區(qū)域過(guò)度沉積而形成的疾病。以往研究認(rèn)為PAI-1的高表達(dá)，或許直接參與瘢痕疙瘩的形成，同時(shí)在瘢痕疙瘩的發(fā)生過(guò)程中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1也發(fā)揮著重要的作用，應(yīng)用小干擾RNA(siRNA)技術(shù)，探討PAI-1-RNAi對(duì)SD大鼠瘢痕組織及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子的影響，為瘢痕疙瘩的發(fā)病機(jī)制及治療開(kāi)辟新

2、的思路。
　　方法:
　　1.SD大鼠背部瘢痕模型的建立與分組:(1)選取雄性SD大鼠，10％醛麻醉，去除部皮毛、消毒，于脊柱兩側(cè)做半徑1.5cm的圓形創(chuàng)面，全層皮膚缺損，每日觀察傷口愈合情況。(2)7天后，創(chuàng)面用微量注射器隔日注射，每次注射高濃度組0.05ml(實(shí)驗(yàn)試劑濃度為20 nmol/ml)，低濃度組0.05ml(實(shí)驗(yàn)試劑濃度為10 nmol/ml)，瘢痕組與正常組注射等同劑量生理鹽水，直至創(chuàng)面愈合。
　　2.

3、采用形態(tài)學(xué)變化及平均愈合時(shí)間，測(cè)量瘢痕厚度，HE染色，Masson染色，Van-Gieson染色比較皮膚瘢痕組織學(xué)改變。
　　3.通過(guò)免疫組化染色（SP法）檢測(cè)TGF-β1的表達(dá)水平結(jié)果:
　　3.1 平均愈合時(shí)間結(jié)果:高濃度組、低濃度組、瘢痕組、正常組平均愈合時(shí)間為(21.15±1.46)d、(24.92±1.55)d、(27.38±1.19)d、(18.61±1.32)d，統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明正常組愈合時(shí)間最快（P＜0.01）

4、，高濃度組愈合時(shí)間明顯短于低濃度組和瘢痕組(P＜0.01)，低濃度組愈合時(shí)間明顯短于瘢痕組(P＜0.01)，瘢痕組愈合時(shí)間最長(zhǎng)(P＜0.01)。（見(jiàn)Table1）
　　3.2 瘢痕測(cè)量結(jié)果:高濃度組、低濃度組、瘢痕組、正常組四組結(jié)果分別為(1.70±0.07)mm、(1.98±0.07)mm、(2.66±0.06)mm、(1.25±0.05)mm,統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明瘢痕組明顯大于高濃度組和低濃度組(P＜0.01)，低濃度組明顯大于高濃

5、度組（P＜0.01），正常組最?。≒＜0.01）。（見(jiàn)Table2）
　　3.3 HE染色
　　瘢痕組真皮層明顯變厚，為周邊正常真皮層厚度的3～4倍，可見(jiàn)膠原纖維粗大，排列紊亂，膠原纖維束形成大量結(jié)節(jié)樣結(jié)構(gòu)，其間有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及毛細(xì)血管擴(kuò)張。（見(jiàn)Fig.2.4）
　　高濃度組真皮層輕度增厚，可見(jiàn)少量膠原纖維粗大，排列較整齊，偶見(jiàn)結(jié)節(jié)樣結(jié)構(gòu)，其間可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及毛細(xì)血管擴(kuò)張。（見(jiàn)Fig.2.2）
　　低濃度組

6、真皮層增厚，可見(jiàn)膠原纖維粗大，排列較紊亂，可見(jiàn)少量膠原纖維束形成的結(jié)節(jié)樣結(jié)構(gòu)，其間有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及毛細(xì)血管擴(kuò)張。(見(jiàn)Fig.2.3)正常組中，真皮層略顯增厚，膠原纖維界限清晰，膠原排列致密，結(jié)構(gòu)平整，彈性纖維減少，未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及毛細(xì)血管擴(kuò)張。（見(jiàn)Fig.2.1）
　　3.4 Masson染色Masson膠原纖維染色結(jié)果:膠原纖維呈藍(lán)色。
　　瘢痕組真皮層可見(jiàn)大量排列紊亂，粗大的深藍(lán)色膠原纖維，可見(jiàn)大量成纖維細(xì)胞，呈梭型。

7、(見(jiàn)Fig.3.4)高濃度組真皮層藍(lán)色膠原纖維染色相對(duì)淡淺，排列稀疏整齊，成纖維細(xì)胞數(shù)量減少。（見(jiàn)Fig.3.2）
　　低濃度組真皮層藍(lán)色膠原纖維染色較深，排列致密，較紊亂，可見(jiàn)成纖維細(xì)胞。（見(jiàn)Fig.3.3）
　　正常組真皮層膠原纖維排列致密，整齊，可見(jiàn)少量成纖維細(xì)胞。(見(jiàn)Fig.3.1)5 Van-Gieson染色瘢痕組真皮層可見(jiàn)少量的褐色彈性纖維與粗大的膠原纖維混雜，排列紊舌。（見(jiàn)Fig.4.4）
　　高濃度組可

8、見(jiàn)少量的彈性纖維排列整齊，顏色較深。（見(jiàn)Fig.4.2）
　　低濃度組可見(jiàn)少量的彈性纖維排列疏松，顏色為淡褐色，和排列紊亂的膠原纖維混雜。（見(jiàn)Fig.4.3）
　　正常組褐色著染的彈性纖維在真皮層中排列致密，顏色深。(見(jiàn)Fig.4.1)6免疫組化結(jié)果: TGF-β1在正常皮膚、瘢痕疙瘩的表皮及真皮中均會(huì)有陽(yáng)性表達(dá)，為黃或棕黃色顆粒，主要定位于上皮基底層細(xì)胞和真皮層的成纖維細(xì)胞(Fig.5)。采用二級(jí)計(jì)分法判定結(jié)果，四組中TG

9、F-β1的表達(dá)水平比較(Table3)，TGF-β1在瘢痕組中陽(yáng)性率為82.61％，高濃度組中為50.00％，低濃度組中陽(yáng)性率為66.69％，正常組中為28.00％。TGF-β1四組中表達(dá)的陽(yáng)性率有明顯差別(P=0.001＜0.05)，在瘢痕組中TGF-β1陽(yáng)性率最高，隨著試劑濃度的增高，TGF-β1陽(yáng)性率降低。
　　結(jié)論:本研究成功建立了大鼠背部瘢痕疙瘩模型，PAI-1-RNAi干預(yù)瘢痕疙瘩后改善其瘢痕厚度，愈合時(shí)間，病理形態(tài)學(xué)