PAI-1-RNAi對SD大鼠瘢痕組織及轉(zhuǎn)化生長因子-β1的影響.pdf

1、目的:瘢痕疙瘩(keloid)是由于皮膚受到損傷后在傷口愈合過程中成纖維細胞的過度增殖和細胞外基質(zhì)(extracellular matrixc，ECM)在傷口區(qū)域過度沉積而形成的疾病。以往研究認為PAI-1的高表達，或許直接參與瘢痕疙瘩的形成，同時在瘢痕疙瘩的發(fā)生過程中轉(zhuǎn)化生長因子-β1也發(fā)揮著重要的作用，應(yīng)用小干擾RNA(siRNA)技術(shù)，探討PAI-1-RNAi對SD大鼠瘢痕組織及轉(zhuǎn)化生長因子的影響，為瘢痕疙瘩的發(fā)病機制及治療開辟新

2、的思路。
　　方法:
　　1.SD大鼠背部瘢痕模型的建立與分組:(1)選取雄性SD大鼠，10％醛麻醉，去除部皮毛、消毒，于脊柱兩側(cè)做半徑1.5cm的圓形創(chuàng)面，全層皮膚缺損，每日觀察傷口愈合情況。(2)7天后，創(chuàng)面用微量注射器隔日注射，每次注射高濃度組0.05ml(實驗試劑濃度為20 nmol/ml)，低濃度組0.05ml(實驗試劑濃度為10 nmol/ml)，瘢痕組與正常組注射等同劑量生理鹽水，直至創(chuàng)面愈合。
　　2.

3、采用形態(tài)學變化及平均愈合時間，測量瘢痕厚度，HE染色，Masson染色，Van-Gieson染色比較皮膚瘢痕組織學改變。
　　3.通過免疫組化染色（SP法）檢測TGF-β1的表達水平結(jié)果:
　　3.1 平均愈合時間結(jié)果:高濃度組、低濃度組、瘢痕組、正常組平均愈合時間為(21.15±1.46)d、(24.92±1.55)d、(27.38±1.19)d、(18.61±1.32)d，統(tǒng)計學結(jié)果表明正常組愈合時間最快（P＜0.01）

4、，高濃度組愈合時間明顯短于低濃度組和瘢痕組(P＜0.01)，低濃度組愈合時間明顯短于瘢痕組(P＜0.01)，瘢痕組愈合時間最長(P＜0.01)。（見Table1）
　　3.2 瘢痕測量結(jié)果:高濃度組、低濃度組、瘢痕組、正常組四組結(jié)果分別為(1.70±0.07)mm、(1.98±0.07)mm、(2.66±0.06)mm、(1.25±0.05)mm,統(tǒng)計學結(jié)果表明瘢痕組明顯大于高濃度組和低濃度組(P＜0.01)，低濃度組明顯大于高濃

5、度組（P＜0.01），正常組最?。≒＜0.01）。（見Table2）
　　3.3 HE染色
　　瘢痕組真皮層明顯變厚，為周邊正常真皮層厚度的3～4倍，可見膠原纖維粗大，排列紊亂，膠原纖維束形成大量結(jié)節(jié)樣結(jié)構(gòu)，其間有大量炎性細胞浸潤及毛細血管擴張。（見Fig.2.4）
　　高濃度組真皮層輕度增厚，可見少量膠原纖維粗大，排列較整齊，偶見結(jié)節(jié)樣結(jié)構(gòu)，其間可見炎性細胞浸潤及毛細血管擴張。（見Fig.2.2）
　　低濃度組

6、真皮層增厚，可見膠原纖維粗大，排列較紊亂，可見少量膠原纖維束形成的結(jié)節(jié)樣結(jié)構(gòu)，其間有炎性細胞浸潤及毛細血管擴張。(見Fig.2.3)正常組中，真皮層略顯增厚，膠原纖維界限清晰，膠原排列致密，結(jié)構(gòu)平整，彈性纖維減少，未見炎性細胞浸潤及毛細血管擴張。（見Fig.2.1）
　　3.4 Masson染色Masson膠原纖維染色結(jié)果:膠原纖維呈藍色。
　　瘢痕組真皮層可見大量排列紊亂，粗大的深藍色膠原纖維，可見大量成纖維細胞，呈梭型。

7、(見Fig.3.4)高濃度組真皮層藍色膠原纖維染色相對淡淺，排列稀疏整齊，成纖維細胞數(shù)量減少。（見Fig.3.2）
　　低濃度組真皮層藍色膠原纖維染色較深，排列致密，較紊亂，可見成纖維細胞。（見Fig.3.3）
　　正常組真皮層膠原纖維排列致密，整齊，可見少量成纖維細胞。(見Fig.3.1)5 Van-Gieson染色瘢痕組真皮層可見少量的褐色彈性纖維與粗大的膠原纖維混雜，排列紊舌。（見Fig.4.4）
　　高濃度組可

8、見少量的彈性纖維排列整齊，顏色較深。（見Fig.4.2）
　　低濃度組可見少量的彈性纖維排列疏松，顏色為淡褐色，和排列紊亂的膠原纖維混雜。（見Fig.4.3）
　　正常組褐色著染的彈性纖維在真皮層中排列致密，顏色深。(見Fig.4.1)6免疫組化結(jié)果: TGF-β1在正常皮膚、瘢痕疙瘩的表皮及真皮中均會有陽性表達，為黃或棕黃色顆粒，主要定位于上皮基底層細胞和真皮層的成纖維細胞(Fig.5)。采用二級計分法判定結(jié)果，四組中TG

9、F-β1的表達水平比較(Table3)，TGF-β1在瘢痕組中陽性率為82.61％，高濃度組中為50.00％，低濃度組中陽性率為66.69％，正常組中為28.00％。TGF-β1四組中表達的陽性率有明顯差別(P=0.001＜0.05)，在瘢痕組中TGF-β1陽性率最高，隨著試劑濃度的增高，TGF-β1陽性率降低。
　　結(jié)論:本研究成功建立了大鼠背部瘢痕疙瘩模型，PAI-1-RNAi干預瘢痕疙瘩后改善其瘢痕厚度，愈合時間，病理形態(tài)學