血管緊張素Ⅱ?qū)δI小管上皮細(xì)胞血小板反應(yīng)蛋白1、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1的影響及大黃酸對(duì)血小板反應(yīng)蛋白1、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1的抑制效應(yīng).pdf

1、目的：探討血管緊張素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ，AngⅡ)及大黃酸對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)血小板反應(yīng)蛋白(TSP1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1(TGF-β-1)表達(dá)的影響。 方法：在體外HK-2培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，觀(guān)察低、中和高不同濃度的AngⅡ(終濃度分別為10-8、10-7和10-6mol/L)對(duì)HK-2 TSP1和TGF-β1mRNA和蛋白表達(dá)的影響，以AngⅡ零濃度為空白對(duì)照。觀(guān)察AngⅡ(10-7mol/L)在0、3、6、1

2、2、24h對(duì)HK-2 TSP1和TGF-β 1mRNA和蛋白表達(dá)的影響，以0h為空白對(duì)照。觀(guān)察TSP1抑制劑G肽對(duì)AngⅡ刺激的HK-2總的TGF-β1和活性TGF-β1表達(dá)的影響。觀(guān)察AngⅡ(10-7mol/L)誘導(dǎo)下低、中和高濃度的大黃酸(10ug/ml、20ug/ml和40ug/ml)對(duì)HK-2 TSP1、TGF-β1的mRNA和蛋白表達(dá)的影響。采用Real Time PCR檢測(cè)TSP1、TGF-β1 mRNA表達(dá)：采用West

3、ern blot檢測(cè)TSP1、TGF-β1蛋白表達(dá)：總的TGF-β1和活性TGF-β1檢測(cè)采用ELISA法。 結(jié)果：與對(duì)照組比較，低、中、高AngⅡ均增加了HK-2細(xì)胞TSP1 mRNA表達(dá)(2.45±0.39、 3.09±0.48、5.39±1.08vs 1.32±0.19；P<0.01)和TGF-β1mRNA表達(dá)(2.96±0.23、3.88±0.46、5.66±0.64 vs 1.68±0.13；P<0.01)：同時(shí)伴有T

4、SP1蛋白表達(dá)的增加(0.2193±0.0382、0.3821±0.0197、0.4925±0.0968 vs0.0323±0.0017；P<0.01)和TGF-β 1蛋白表達(dá)的增加(0.2399±0.0714、0.4021±0.0184、0.5149±0.0112 vs 0.0109±0.0029；P<0.01)。AngⅡ(終濃度為10-7mol/L)以時(shí)間依賴(lài)的方式促進(jìn)HK-2細(xì)胞TSP1和TGF-β1mRNA表達(dá)(r TSP1=0

5、.84，rTGF-β1=0.89，P<0.01)；伴有TSP1和TGF-β1的蛋白表達(dá)增加(rTSP1=0.82，rTGF-β1=0.91，P<0.01)；其中TSP1的表達(dá)峰值在6h，TGF-β1 mRNA的表達(dá)峰值在12h。與對(duì)照組比，AngⅡ(10-7mol/L)上調(diào)總的、活性TGF-β1表達(dá)(t總=2.894，t活=2.786，P<0.05)，G(10umol/L)肽僅下調(diào)活性TGF-β4表達(dá)(t活=3.326，P<0.05)，

6、對(duì)總的TGF-β1表達(dá)無(wú)影響。與AngⅡ陽(yáng)性對(duì)照組比較，中濃度和高濃度大黃酸明顯抑制了AngⅡ(10-7mol/L)誘導(dǎo)的TSP1、TGF-β1的mRNA(P<0.05；P<0.01)和蛋白表達(dá)(P<0.05；P<0.01)。中濃度大黃酸干預(yù)組總的TGF-β1含量和活性TGF-β1含量均減少，(P<0.05)；高濃度大黃酸干預(yù)組總的TGF-β1含量和活性TGF-β1含量均明顯減少(P<0.01)。 結(jié)論：AngⅡ能促進(jìn)人腎小管上