轉(zhuǎn)化生長因子β1抗心臟移植排斥反應(yīng)的作用及機(jī)制研究.pdf

1、如何預(yù)防和控制心臟移植排斥反應(yīng)是心臟移植成功的關(guān)鍵。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforminggrowthfactorβ1，TGF-β1)是目前發(fā)現(xiàn)的具有很大潛力的免疫抑制細(xì)胞因子，具有抑制T細(xì)胞的增殖，參與免疫偏離的形成，調(diào)控抗原提呈細(xì)胞等諸多功能。本課題通過大鼠頸部心臟移植模型，探討轉(zhuǎn)化生長因子β1抗心臟移植排斥反應(yīng)的作用及機(jī)制，以期為其應(yīng)用于臨床心臟移植提供理論依據(jù)。本課題共分兩部分： 第一部分 大鼠頸部心臟移植

2、模型的建立及改進(jìn) 目的探討大鼠頸部心臟移植術(shù)的改進(jìn)和研究心臟移植排斥反應(yīng)。方法將Chen術(shù)式加以改進(jìn)，采用供心主動脈與受體頸總動脈行端側(cè)吻合，進(jìn)行100次大鼠頸部心臟移植。結(jié)果新方法使供心總?cè)毖獣r間縮短至25分鐘，7天存活率為97％。結(jié)論改進(jìn)的術(shù)式簡單實用，有較高的存活率，值得推廣。 第二部分 轉(zhuǎn)化生長因子β1抗心臟移植排斥反應(yīng)的作用及機(jī)制研究 實驗一轉(zhuǎn)化生長因子β1抗心臟移植排斥反應(yīng)的作用研究

3、目的探討轉(zhuǎn)化生長因子β1對大鼠心臟移植排斥反應(yīng)的抑制作用。方法采用大鼠頸部心臟移植模型，隨機(jī)分為4組：對照組，CsA組，TGF-β1組，TGF-β1+CsA半劑量組。觀察移植心臟的存活天數(shù)及心臟跳動情況。結(jié)果TGF-β1組、TGF-β1+CsA半劑量組和CsA組移植心臟存活時間均較對照組顯著延長(P＜0.01)。TGF-β1組移植心臟存活時間較CsA組明顯延長(P＜0.05)，TGF-β1+CsA半劑量組移植心臟存活時間最長，優(yōu)于TGF

4、-β1組(P＜0.05)和CsA組(P＜0.01)。結(jié)論TGF-β1對心臟移植排斥反應(yīng)有較強的免疫抑制作用，可明顯延長移植心臟的存活時間，并且與CsA有協(xié)同作用，可減少CsA的用量。 實驗二轉(zhuǎn)化生長因子β1對心臟移植排斥反應(yīng)中心肌細(xì)胞凋亡的影響 目的探討轉(zhuǎn)化生長因子β1對心臟移植排斥反應(yīng)中心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法采用大鼠頸部心臟移植模型，隨機(jī)分為3組：對照組，移植組，TGF-β1組。分別于術(shù)后第1、3、5、7天各取4只移

5、植心臟，原位末端標(biāo)記(TUNEL)法染色檢測心肌細(xì)胞凋亡，以心肌細(xì)胞凋亡陽性細(xì)胞數(shù)占總心肌細(xì)胞數(shù)的百分比作為心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosisindex，AI)。用免疫組化方法觀察Bcl-2、Bax的表達(dá)情況。結(jié)果移植組心肌細(xì)胞于術(shù)后第1天即已出現(xiàn)凋亡，第3天明顯增加，第7天達(dá)高峰。TGF-β1組各時間點心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯小于對應(yīng)的移植組(P＜0.01)。與移植組相比，TGF-β1組心肌細(xì)胞Bax表達(dá)明顯降低(P＜0.01)。結(jié)論T

6、GF-β1對心臟移植排斥反應(yīng)中心肌細(xì)胞凋亡有顯著抑制作用。TGF-β1對心肌細(xì)胞凋亡的抑制作用可能與其下調(diào)Bax表達(dá)，提高Bcl-2/Bax有關(guān)。 實驗三轉(zhuǎn)化生長因子β1對心臟移植排斥反應(yīng)中IL-12、IL-15、IL-18、IL-4和IL-10表達(dá)的影響 目的探討轉(zhuǎn)化生長因子β1對大鼠心臟移植排斥反應(yīng)中IL-12、IL-15、IL-18、IL-4和IL-10表達(dá)的影響。方法采用大鼠頸部心臟移植模型，隨機(jī)分為3組：對照組

7、，移植組，TGF-β1組。于術(shù)后第5天取移植心臟，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法觀察IL-12、IL-15、IL-18、IL-4和IL-10的表達(dá)情況。結(jié)果移植組IL-12、IL-15、IL-18表達(dá)明顯升高，IL-4和IL-10表達(dá)顯著降低(與對照組相比，P＜0.01)。TGF-β1組IL-12、IL-15、IL-18表達(dá)明顯降低，而IL-4和IL-10表達(dá)顯著升高(與移植組相比，P＜0.01)。結(jié)論TGF-β1對心臟移植排

8、斥反應(yīng)的免疫抑制作用可能與其抑制IL-12、IL-15、IL-18等Th1型細(xì)胞因子的表達(dá)，促進(jìn)Th2型細(xì)胞因子IL-4和IL-10的表達(dá)有關(guān)。 實驗四轉(zhuǎn)化生長因子β1對心臟移植排斥反應(yīng)中CD44、選擇素E、LFA-1、VCAM-1表達(dá)的影響 目的探討轉(zhuǎn)化生長因子β1對大鼠心臟移植排斥反應(yīng)中CD44、選擇素E、LFA-1、VCAM-1表達(dá)的影響。方法采用大鼠頸部心臟移植模型，隨機(jī)分為3組：對照組，移植組，TGF-β1組。

9、于術(shù)后第5天取移植心臟，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法觀察CD44、選擇素E、血管細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1)、淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1(LFA-1)的表達(dá)情況。結(jié)果移植組CD44、選擇素E、LFA-1、VCAM-1表達(dá)明顯升高(與對照組相比，P＜0.01)。TGF-β1組CD44、選擇素E、LFA-1、VCAM-1表達(dá)明顯降低(與移植組相比，P＜0.01)。結(jié)論TGF-β1對心臟移植排斥反應(yīng)的免疫抑制作用可能與其抑制CD

10、44、選擇素E、LFA-1、VCAM-1等粘附分子的表達(dá)有關(guān)。 實驗五轉(zhuǎn)化生長因子β1對心臟移植排斥反應(yīng)中穿孔素和顆粒酶B表達(dá)的影響 目的探討轉(zhuǎn)化生長因子β1對大鼠心臟移植排斥反應(yīng)中穿孔素和顆粒酶B表達(dá)的影響。方法采用大鼠頸部心臟移植模型，隨機(jī)分為3組：對照組，移植組，TGF-β1組。于術(shù)后第5天取移植心臟，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法觀察穿孔素和顆粒酶B的表達(dá)情況。結(jié)果移植組穿孔素和顆粒酶B表達(dá)明顯升高(與

11、對照組相比，P＜0.01)。TGF-β1組穿孔素和顆粒酶B表達(dá)明顯降低(與移植組相比，P＜0.01)。結(jié)論TGF-β1對心臟移植排斥反應(yīng)的免疫抑制作用可能與其抑制穿孔素和顆粒酶B的表達(dá)有關(guān)。 實驗六轉(zhuǎn)化生長因子β1對心臟移植排斥反應(yīng)中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)表達(dá)的影響 目的探討轉(zhuǎn)化生長因子β1對大鼠心臟移植排斥反應(yīng)中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)表達(dá)的影響。

12、方法采用大鼠頸部心臟移植模型，隨機(jī)分為3組：對照組，移植組，TGF-β1組。于術(shù)后第5天取移植心臟，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法觀察iNOS的表達(dá)情況。結(jié)果移植組iNOS表達(dá)明顯升高(與對照組相比，P＜0.01)。TGF-β1組iNOS表達(dá)明顯降低(與移植組相比，P＜0.01)。結(jié)論TGF-β1對心臟移植排斥反應(yīng)的免疫抑制作用可能與其抑制iNOS的表達(dá)有關(guān)。 總結(jié) 本論文研究結(jié)果顯示： 1.成功建立大

13、鼠頸部心臟移植模型并加以改進(jìn)，改進(jìn)的術(shù)式簡單實用，有較高的存活率，值得推廣。 2.TGF-β1對心臟移植排斥反應(yīng)有較強的免疫抑制作用，明顯延長移植心臟的存活時間。TGF-β1對心臟移植排斥反應(yīng)的免疫抑制作用可能與其抑制IL-12、IL-15、IL-18、CD44、選擇素E、LFA-1、VCAM-1的表達(dá)，促進(jìn)IL-4和IL-10的表達(dá)有關(guān)。此外，TGF-β1還可通過下調(diào)Bax表達(dá)，提高Bcl-2/Bax比例而抑制移植排斥反應(yīng)中心