血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)中的作用.pdf

1、目的：1.建立Wistar，SD大鼠原位肝移植(ROLT)動(dòng)物排斥模型，觀察Wistar->SD大鼠肝移植后移植肝臟能否產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。2.在上述模型的基礎(chǔ)上，測(cè)定各組模型肝臟功能，細(xì)胞因子血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascularendothelialgrowthfactorVEGF)及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basicfibroblastgrowthfactorbFGF)的表達(dá)或水平變化，以了解VEGF及bFGF的表達(dá)或水平狀況是否與

2、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，新生血管生成，移植物存活時(shí)間有關(guān)系及關(guān)系如何。通過(guò)以上三部分實(shí)驗(yàn)，試圖探索VEGF在大鼠原位肝移植急性排斥中的作用機(jī)制。 方法：1.按“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型，將大鼠分為二組：實(shí)驗(yàn)組：急性排斥反應(yīng)組(Wistar->SD)；對(duì)照組：免疫耐受組(SD->SD)。根據(jù)移植后時(shí)間的不同，上述實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組又各分為1，3，7天亞組，每個(gè)亞組4只大鼠。各組大鼠于術(shù)后按預(yù)定的天數(shù)殺死，取血、肝臟標(biāo)本、脾臟標(biāo)本。全自動(dòng)

3、化生化分析儀測(cè)定肝臟功能情況；觀察肝臟組織病理變化；ELISA測(cè)定受體鼠血漿中VEGF的水平；免疫組化、RT-PCR法測(cè)量肝組織、脾組織中VEGF的表達(dá)情況。2.同上述方法建立大鼠原位肝移植，分組相同：急性排斥組，對(duì)照組。同法測(cè)定受體鼠血漿中bFGF的水平；免疫組化、RT-PCR法測(cè)量肝組織、脾組織中BFGF的表達(dá)情況。后將此兩種因子各自被檢測(cè)出的在血液中的水平變化和在肝、脾組織中的表達(dá)狀況進(jìn)行比較，從而最終揭示出VEGF在大鼠原位肝移

4、植急性排斥反應(yīng)中的作用機(jī)。 結(jié)果：1.在未使用免疫抑制劑的情況下，對(duì)照組SD-SD大鼠原位肝移植后能產(chǎn)生免疫耐受，其1周存活率為75％，病理檢查顯示：肝組織形態(tài)改變輕微，肝細(xì)胞和肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞部分變性腫脹，個(gè)別肝細(xì)胞壞死，匯管區(qū)輕度擴(kuò)張及伴有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝竇輕度充血并伴有少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，整個(gè)肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常。肝功能損害較輕，7天左右基本恢復(fù)到正常。而實(shí)驗(yàn)組Wistar->SD大鼠原位肝移植，肝組織病理改變明顯，表現(xiàn)為肝

5、細(xì)胞變性嚴(yán)重，有部分灶狀及橋狀壞死，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹明顯，肝竇顯著充血，明顯擴(kuò)張，匯管區(qū)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，匯管區(qū)小靜脈、終末肝靜脈及中央靜脈內(nèi)皮下淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，膽管上皮細(xì)胞腫脹，結(jié)構(gòu)破壞，變性壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)不清晰。肝臟功能損害進(jìn)行性加重，一周存活率為50％，一般生存5-10天，達(dá)到Banff急性排斥反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的中、重度水平。2.在急排組，肝臟、脾臟組織VEGF表達(dá)及血漿VEGF水平檢測(cè)均較對(duì)照組VEGF為高；而在急排組的肝臟、脾臟bFGF有

6、一定量的表達(dá)，血漿bFGF水平檢測(cè)尚可，但都明顯低于同樣急排組VEGF的表達(dá)和水平。3.VEGF表達(dá)與受體鼠的存活時(shí)間成反比。綜上所述，提示VEGF是通過(guò)介導(dǎo)血管新生和炎癥反應(yīng)這兩種因素的相互滲透，相互促進(jìn)，從而在急性排斥反應(yīng)中發(fā)生作用的。 結(jié)論：1.Wistar->SD大鼠之間的原位肝移植模型可產(chǎn)生中、重度的免疫排斥反應(yīng)，是一種較理想的可作為研究急性排斥反應(yīng)的動(dòng)物模型。2.VEGF是通過(guò)介導(dǎo)血管新生和炎癥反應(yīng)這兩種因素相互關(guān)系