血管內(nèi)皮生長因子在急性白血病中表達的研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文血管內(nèi)皮生長因子在急性白血病中表達的研究姓名：崔華東申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：何娟20030301離心涂片枧作纓照涂片，～∞℃保存，采用SAP方法檢測。保存的纓胞涂片玲孬嗣鼴定lO分鐘，如羊盤漶室濕封閉30分鐘，然麓加入∞心兔抗人V囂GF多抗(1：100)37℃孵育2小時，再依次鴦鼙入生物素億羊撬兔二抗翻SAP復(fù)合物37℃孵育30分錚，堅固紅顯色5一10分鐘，蘇本素復(fù)染2分鐘。以PBS代替一撬終熙性

2、對照。光學(xué)顯微鏡下觀察計數(shù)帑性綱驄數(shù)。綱胞漿染成淡粉色至深蘊色酶秀鼯性纓艟，陽性纓施數(shù)大手∞％判定勢疆性。西、流式纘穩(wěn)米方法檢測VEGF表達量對其中30鍘白斑病標本和9鑲對照組標本應(yīng)耀流式細憨術(shù)方法檢測VEGF豹表達量。分離酶單個棱纓胞，70％冷乙醇匿定，一20℃保存。檢測時4℃離心棄乙醇，PBS洗兩次，l％小牛盤漬封閉弼分鋅，加入兔抗入VEGF多抗(終濃度l：100)塞溫孵寅2小時，PBS洗兩次后褥加入疆％標記的羊抗兔二擾(終濃度1：

3、100)室溫避光孵育30分事＆PBS洗兩次，重新懸浮緬脆，上槐檢測。以PBS代替一抗作陰性對照。以平均熒光強度(Meanfluole$ceIlCeintensity，MFI)表示VEGF的表達量：MFI=加一抗細胞的熒光強度一陰性對照綱耱的熒光強度。五、流式細脆術(shù)進行細施髑期分析70％冷乙醇固定的細胞4。C離心棄乙醇，PBS洗兩次；掇入l礎(chǔ)含RNA酶(200“∥蕊)的PBS，37℃孵育30分鐘，離心棄RNA酶，冷PBS浼兩次；加入含碘化