轉(zhuǎn)化生長因子-β1在組織工程心臟瓣膜構(gòu)建中的應用.pdf

1、第一部分轉(zhuǎn)化生長因子-β1對體外構(gòu)建組織工程心臟瓣膜的作用研究目的研究轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)在組織工程心臟瓣膜(TEHV)體外構(gòu)建中的作用。方法經(jīng)胰酶/EDTA、去污劑TritonX-100和核酸酶處理，去除豬主動脈瓣葉的細胞成分，然后在其表面種植大鼠肌成纖維細胞，構(gòu)建TEHV。實驗組培養(yǎng)基中添加TGF-β1(10ng/ml)，對照組采用普通培養(yǎng)基。體外培養(yǎng)2w后取瓣葉，作HE染色和掃描電鏡觀察，以及羥脯氨酸含量、DNA含量

2、、瓣葉最大負荷力檢測，應用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測瓣膜細胞MMP-13和TIMP-1mRNA的表達。 結(jié)果：實驗組與對照組比較，HE染色和掃描電鏡顯示細胞緊密聯(lián)合且細胞外基質(zhì)更豐富，羥脯氨酸含量和DNA含量增高，最大負荷力提高，MMP-13mRNA和TIMP-1mRNA的表達增強。結(jié)論TGF-β1在TEHV體外構(gòu)建過程中能促進細胞的生長和增殖，加強ECM分泌，提高瓣膜的最大負荷力。 第二部分轉(zhuǎn)化生長因

3、子-β1基因轉(zhuǎn)染細胞構(gòu)建組織工程心臟瓣膜作用研究 目的：通過對TGF-β1基因轉(zhuǎn)染大鼠肌成纖維細胞，使后者自分泌TGF-β1，研究其在天然支架TEHV構(gòu)建中的作用。方法應用脂質(zhì)體介導的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將pcDNA3.0/TGF-β1表達載體導入大鼠肌成纖維細胞，轉(zhuǎn)染48h后G418篩選3w，培養(yǎng)出穩(wěn)定表達TGF-β1蛋白的轉(zhuǎn)基因肌成纖維細胞。轉(zhuǎn)染后48h和4w采用SABC方法檢測TGF-β1蛋白表達。種植轉(zhuǎn)基因肌成纖維細胞于去細胞

4、豬主動脈瓣葉為實驗組A，種植未轉(zhuǎn)基因肌成纖維細胞于去細胞豬主動脈瓣葉加TGF-β1(10ng/ml)培養(yǎng)為實驗組B，種植未轉(zhuǎn)基因肌成纖維細胞于去細胞豬主動脈瓣葉不加TGF-β1培養(yǎng)為對照組，構(gòu)建TEHV。HE染色和掃描電鏡觀察細胞增殖情況，羥脯氨酸含量、DNA含量、力學測試儀測定其最大負荷力。結(jié)果轉(zhuǎn)染48h和4w后肌成纖維細胞可以穩(wěn)定表達TGF-β1蛋白。實驗組A分別較實驗組B和對照組的細胞增殖旺盛，膠原分泌較多，力學性能增強。結(jié)論轉(zhuǎn)T