基于核磁共振的SD大鼠誘導(dǎo)的胰腺癌及上皮內(nèi)瘤變組織水溶性萃取物代謝組學(xué)研究.pdf

1、本課題內(nèi)容分為兩部分：第一部分：研究SD大鼠原位誘導(dǎo)胰腺癌模型建立方法及建模過(guò)程特點(diǎn)。第二部分通過(guò)建立大鼠胰腺癌模型，獲得上皮內(nèi)瘤變（PanIN）及胰腺癌(P.C)組織樣本，采用NMR代謝組學(xué)和多變量統(tǒng)計(jì)分析方法檢測(cè)P.C、PanIN及正常胰腺之間的代謝差異，為疾病代謝變化研究及早期診斷方法的建立提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)及理論依據(jù)。
　　第一部分7，12-二甲基苯并蒽誘導(dǎo)SD大鼠胰腺癌動(dòng)物模型建立及過(guò)程特點(diǎn)
　　目的：研究7,12-二甲

2、基苯并蒽（DMBA）原位包埋誘導(dǎo)SD大鼠P.C動(dòng)物模型的建立方法及建模過(guò)程特點(diǎn)。
　　方法:84只大鼠被隨機(jī)均分為6組實(shí)驗(yàn)組與1組假手術(shù)對(duì)照組（每組12只）。實(shí)驗(yàn)組于大鼠胰腺體尾部被膜下埋入致癌劑DMBA7mg，荷包縫合建立實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物模型，假手術(shù)對(duì)照組行胰體尾被膜荷包縫合而未植入 DMBA，實(shí)驗(yàn)組分別于2、3、4、6、8、12周處死，假手術(shù)對(duì)照組于12周處死并切取包埋部位組織.各組均連續(xù)監(jiān)測(cè)一般情況，觀察腹腔情況并行組織病理學(xué)檢查

3、。
　　結(jié)果:建?？偹劳雎?.56％，建模過(guò)程中一般及腹腔情況良好。癌總體發(fā)生率為25%。不同誘導(dǎo)時(shí)間（2、3、4、6、8、12周）的癌發(fā)生率分別為0、27.27、18.18、18.18、45.45、41.67%，平均直徑分別為0、2、2.5、3.5、4.6、5.8 mm。8周以上實(shí)驗(yàn)組與4周以下癌發(fā)生率呈現(xiàn)顯著差異（P<0.05）。2、3、4周樣本分別檢出1例PanIN，發(fā)生率為5.8%（3/51)。
　　結(jié)論：SD大鼠胰

4、腺體尾部被膜下包埋DMBA方法可以成功構(gòu)建P.C模型。第2周即產(chǎn)生PanIN，第8至12周模型一般情況較好，成癌率高，較為符合實(shí)驗(yàn)需求。
　　第二部分基于核磁共振的SD大鼠誘導(dǎo)的胰腺癌及上皮內(nèi)瘤變組織水溶性萃取物波譜分析
　　目的：研究SD大鼠PanIN、P.C與正常胰腺組織水溶性萃取物的代謝差異，提出差異代謝標(biāo)志物，探討該技術(shù)在早期診斷的可行性。
　　方法：通過(guò)SD大鼠胰體尾包埋DMBA建立動(dòng)物模型，分別誘導(dǎo)3周與1

5、2周建立實(shí)驗(yàn)組，以相同手術(shù)方式處理但不埋入DMBA，飼養(yǎng)12周作為假手術(shù)組，分別采集各組胰腺組織并行病理檢查，根據(jù)病理結(jié)果分別歸為PanIN組、P.C組與對(duì)照組。各組行甲醇-氯仿法萃取、上清液凍干等預(yù)處理后，以500MHz高分辨率核磁共振儀進(jìn)行波譜檢測(cè)，所得數(shù)據(jù)采用主成分分析（PCA）、偏最小二乘判別分析（PLS-DA）、正交偏最小二乘方差判別分析（OPLS-DA）法進(jìn)行多變量統(tǒng)計(jì)分析處理。
　　結(jié)果：經(jīng)病理檢查證實(shí)，模型誘導(dǎo)獲得

6、PanIN樣本11例、P.C樣本15例、對(duì)照樣本14例.多變量統(tǒng)計(jì)分析共篩選出差異代謝物37種，1-甲基組氨酸、己二酸、檸檬酸、二甲基甘氨酸、賴(lài)氨酸、肌氨酸僅在 PanIN組含量上升，肌酸含量下降。乙酰膽堿、抗壞血酸、甘油、牛磺酸、α-葡萄糖僅在P.C組含量上升。2-羥基丁酸、3-羥基丁酸、醋酸、谷氨酸、異亮氨酸、乳酸、亮氨酸、肌醇、苯丙氨酸、纈氨酸在PanIN組與P.C組含量均上升，其中3-羥基丁酸、醋酸、乳酸在PanIN組的上升更加

7、顯著。3-甲基組氨酸、腺苷、天冬氨酸、甜菜堿、胞嘧啶核苷、肌苷、煙酰胺、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）、煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸（NADP）、尿嘧啶、尿苷、尿苷二磷酸葡糖、維生素K于PanIN組與P.C組含量均下降，其中天冬氨酸于PanIN組含量降低更為顯著，腺苷、胞嘧啶核苷、煙酰胺、NADP、尿嘧啶、尿苷、維生素K于P.C組含量降低更為明顯。犬尿胺酸、甲硫氨酸在 PanIN組中含量上升，而在 P.C組中含量下降。
　　結(jié)論：成功建