維甲酸誘導腭裂模型中胚鼠腭組織與母體多器官的核磁共振代謝組學研究.pdf

1、目的：
　　先天性腭裂是常見的顱頜面畸形，其病因尚未清楚。代謝組學是一門新興學科，能夠通過研究小分子代謝物質的整體變化規(guī)律來表征生物過程，在腭裂病因學研究中越來越受到重視。本研究的目的是運用基于核磁共振技術的代謝組學研究維甲酸誘導的胚鼠腭裂組織與母體多器官的代謝變化，探討腭裂發(fā)生機制。
　　方法：
　　⑴建立昆明小鼠腭裂模型：將24只昆明孕鼠隨機分為對照組和維甲酸組，每組12只，在胚胎10.5天，對實驗組按70mg/k

2、g劑量使用維甲酸灌胃，而對照組使用植物油灌胃。⑵在孕期14.5天（E14.5）應用7.0T1H-NMR檢測胚鼠的腭組織，母鼠羊水、胎盤以及肝組織在體代謝物的含量。⑶分離胚鼠的腭組織，母鼠羊水、胎盤、血清以及肝組織，并經(jīng)過勻漿、萃取、凍干、吹干，提取水溶性代謝物和脂溶性代謝物。⑷應用9.4T1H-NMR檢測胚鼠胎腭組織，母鼠羊水、胎盤、血清以及母體肝水溶性代謝物和脂溶性代謝物。⑸運用主成分分析法探尋生物標志物，尋找腭裂發(fā)生過程中的關鍵代謝

3、通路，以及多器官之間的代謝物關聯(lián)性。
　　結果：
　?、匐窠M織：7T顯示維甲酸組的脂質/膽堿、脂質明顯增高（p<0.05）。9.4T檢測顯示維甲酸組，降低的代謝物包括：磷酸膽堿、谷氨酰胺,而增強的代謝物包括：膽堿、檸檬酸、甜菜堿、葡萄糖、膽固醇和脂。②羊水：7T顯示維甲酸組的膽堿顯著性降低（p<0.05）。9.4T磁共振顯示：降低的代謝物包括：膽堿、檸檬酸、膽固醇，而未見明顯增強的代謝物。通過羊水代謝成功建立預測模型PCA-

4、class(RA)、PCA-calss(control)，并且在腭組織和羊水組織的O2PLS模型中發(fā)現(xiàn)膽堿具有正相關性（皮爾森相關系數(shù)為0.427）。③胎盤組織：7T顯示維甲酸組脂質/膽堿明顯增高（p<0.05）。9.4T檢測顯示維甲酸組，降低的代謝物包括：磷酸膽堿、谷氨酰胺、牛磺酸，而增強的代謝物包括：檸檬酸、甜菜堿、膽固醇。④肝臟：7T顯示維甲酸組可見膽堿降低，而脂肪/膽堿明顯增高（p<0.05）。9.4T檢測顯示維甲酸組，降低的代

5、謝物有甘氨酸；而增強的代謝物包括：丙氨酸、磷酸膽堿、?；撬?、膽固醇和脂質。⑤血清：9.4T磁共振顯示：降低的代謝物包括：膽堿、檸檬酸、膽固醇、肌酸、谷氨酰胺，而未見明顯增強的代謝物。
　　結論：
　?、拍憠A代謝、膽固醇代謝和三羧酸循環(huán)是維甲酸組腭組織（E14.5）發(fā)生改變的關鍵代謝通路。⑵通過羊水的代謝物分析建立穩(wěn)定的腭裂預測模型，而膽堿在羊水與腭組織的正相關性是這個預測模型的內(nèi)在因素。⑶代謝組學分析提示維甲酸組能誘導胎盤功