TGFβ1和TGFβ3在維甲酸誘導(dǎo)腭裂以及正常小鼠腭部的表達(dá).pdf

1、目的： 腭裂(cleft of palate)是一種常見的先天發(fā)育畸形，在顱頜面畸形中占絕大部分。它的發(fā)生給患者及家屬的生活和心理帶來了較大的影響。目前，已有學(xué)者就腭裂發(fā)生機(jī)制做出了較多的基礎(chǔ)及臨床方面的研究，并取得了一定的成就。但它是一種多基因遺傳病，目前其發(fā)病機(jī)制仍不甚明確。腭裂發(fā)病機(jī)制的研究可以為腭裂的預(yù)防和產(chǎn)前診斷提供廣闊的前景。 維甲酸(retinoic acid，RA)在生物體的胚胎發(fā)育、器官形成、細(xì)胞分化和

2、維持正常的生理穩(wěn)態(tài)中起重要作用。在胚胎發(fā)育過程中，內(nèi)源性維甲酸與正常的生長發(fā)育密切相關(guān)。過量的維甲酸有明顯的毒副作用，可以使基因錯誤表達(dá)從而導(dǎo)致胚胎的異常發(fā)育，誘導(dǎo)組織器官畸形形成。維甲酸信號的功能最終是通過基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控來實現(xiàn)的，如生長因子、細(xì)胞因子及其受體、激素、轉(zhuǎn)錄因子、激酶及磷酸酶、細(xì)胞內(nèi)酶和效應(yīng)因子等，都受維甲酸的調(diào)節(jié)。近年來國外學(xué)者對維甲酸(retinoic acid，RA)調(diào)控基因表達(dá)與其誘導(dǎo)腭裂形成的關(guān)系進(jìn)行了研究，但RA

3、誘導(dǎo)腭裂畸形的機(jī)制仍不明確。 轉(zhuǎn)化生長因子p超家族(transforming growth factor β，TGFβ)是一類具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，在多方面參與胚胎發(fā)育，它對不同類型的細(xì)胞既可以促進(jìn)其增殖、生長分化，也可以抑制細(xì)胞的生長，是一種細(xì)胞生長的雙向調(diào)節(jié)因子。近來有學(xué)者通過先提取樣本的DNA，選擇特定基因標(biāo)記引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，然后檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。篩選出TGFβ可能為腭裂發(fā)生的易感基因。因此，本實驗預(yù)通過維甲

4、酸建立C57BL／6J系小鼠腭裂模型，在此基礎(chǔ)上通過免疫組化來檢測TGFβl和TGFβ3在維甲酸誘導(dǎo)腭裂以及正常C57BL/6J系小鼠腭部表達(dá)的時空變化，為進(jìn)一步研究做準(zhǔn)備。 方法：選10周齡左右，雄性體重在25克以上，雌性體重在20克以上的C57BL/6J小鼠。于第一日晚5時按雌雄比例2：1合籠，次日早8點檢查陰栓情況，陽性者記為妊娠0天(gestation 0day，GD0)。共得孕鼠(10 )只，將所得孕鼠隨機(jī)分成兩組：第

5、一組為實驗組，共(5)只；第二對照組為組，共(5)只。實驗組孕鼠在GD10上午10時按照0.01 ml/g體重灌注10mg/ml的維甲酸植物油溶液，對照組小鼠按0.01ml/g體重灌注植物油。實驗組與對照組分別于GD14、GD15、GD16 3個時間點處死實驗小鼠取出胚胎。取胚胎鼠頭固定、包埋后切片，進(jìn)行免疫組化檢測TGFβ1和TGFβ3在各時間點于小鼠腭部的表達(dá)情況。由此，得出TGFβ1和TGFp3在維甲酸誘導(dǎo)腭裂小鼠以及正常小鼠腭突

6、中的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1維甲酸給藥組與對照組間充質(zhì)中TGFβ3的表達(dá)隨著胚胎的發(fā)育都有所降低，GD14、GD16維甲酸給藥組與對照組間充質(zhì)中TGFβ3的表達(dá)相同，GD15給藥組TGFβ3的表達(dá)偏高；給藥組與對照組早期(GD14，GD15) TGFβ1的表達(dá)較為一致，隨著胚胎的發(fā)育有所升高，然而在發(fā)育后期(GD16)TGFβl在實驗組腭突中的表達(dá)較對照組偏高。 2維甲酸給藥組中嵴上皮中的TGFβ3一直處于高表達(dá)狀

7、態(tài)，而對照組中嵴上皮中TGFβ3的表達(dá)隨胚胎的發(fā)育逐漸降低；給藥組中嵴上皮中TGFβ1的表達(dá)隨胚胎的發(fā)育明顯升高，對照組中嵴上皮中TGFβ1的表達(dá)則是先升高而后降低。 3維甲酸給藥組與對照組鼻腔側(cè)上皮中TGFβ3的表達(dá)在GD14相同，GD15給藥組比對照組高，GD16則對照組稍高；維甲酸給藥組與對照組鼻腔側(cè)上皮中TGFβ1的表達(dá)在GD14時相同，GD15給藥組比對照組偏低，GD16實驗組TGFβ1表達(dá)明顯低于對照組。 結(jié)

8、論： 1、實驗組 TGFβ3在發(fā)育早期(GD14，GD15)間充質(zhì)中的表達(dá)偏高，TGFβ1的表達(dá)偏低，說明TGFβ1和TGFβ3可能通過抑制間充質(zhì)細(xì)胞的增殖，影響腭突的上抬，誘發(fā)腭裂。 2、實驗組中嵴上皮中TGFβ3始終處于高水平表達(dá)，可能使中嵴上皮向口腔側(cè)上皮異常分化；晚期(GD16)TGFβ1的高水平表達(dá)，也可能促進(jìn)中嵴上皮的異常分化?？赏茰y。TGFβ1和TGFβ3可能誘導(dǎo)中嵴上皮的異常分化，誘發(fā)腭裂。 3、