Wnt5a在腭發(fā)育及維甲酸誘導(dǎo)腭裂發(fā)生中的表達(dá)及其與Shh、FGF-10相關(guān)性的研究.pdf

1、背景： 腭裂(Cleft Palate，CP)是口腔頜面部最常見的先天性發(fā)育畸形，占所有先天性畸形的65％左右，全世界新生兒發(fā)生率1/700，在我國(guó)發(fā)生率為1.82‰。在已知能誘發(fā)腭裂的環(huán)境因素中，維生素A的衍生物全反式維甲酸(all-trans retinoic acid，atRA)是致畸作用比較顯著的一種，atRA所誘導(dǎo)的腭裂形成的機(jī)制尚不明確。小鼠腭裂的發(fā)生形式與人類腭裂發(fā)生非常相似，而小鼠基因與人類的同源性高達(dá)99％以上

2、，因此深入了解小鼠腭裂發(fā)生機(jī)制將為剖析人類腭裂發(fā)生奠定理論基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用穩(wěn)定的維甲酸誘導(dǎo)小鼠腭裂模型，觀察正常組和實(shí)驗(yàn)組胚鼠的腭突發(fā)育的形態(tài)學(xué)變化；借助免疫組織化學(xué)法和分子生物學(xué)RT-PCR技術(shù)，觀察Wnt5a基因在維甲酸誘導(dǎo)腭裂及正常對(duì)照組腭突發(fā)育中的表達(dá)和分布的改變，同時(shí)檢測(cè)信號(hào)分子Shh和FGF-10在不同的發(fā)育階段的表達(dá)水平變化。 目的： 通過(guò)觀察Wnt5a與Shh，F(xiàn)GF-10在正常腭突發(fā)育和腭裂形成中不同發(fā)

3、育階段的表達(dá)和分布改變，探討其在腭發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮的作用以及維甲酸誘導(dǎo)腭裂中的發(fā)生機(jī)制；并進(jìn)一步探索信號(hào)分子Wnt5a與Shh，F(xiàn)GF-10之間是否存在相關(guān)性。 方法：建立維甲酸誘導(dǎo)的腭裂小鼠模型，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)Wnt5a在胚胎14，15及16天的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠腭突中的蛋白水平表達(dá)和分布變化。采用RT-PCR方法檢測(cè)信號(hào)分子Wnt5a，Shh和FGF-10在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1、維甲酸對(duì)腭

4、突融合的影響：維甲酸實(shí)驗(yàn)組小鼠腭裂發(fā)生率為100％。HE染色結(jié)果顯示：對(duì)照組小鼠腭突發(fā)育正常，雙側(cè)腭突在中線處接觸融合。實(shí)驗(yàn)組小鼠腭突發(fā)育瘦小，腭突上抬障礙、舌體下降明顯延遲，兩側(cè)腭突不能在中線處接觸融合。 2、Wnt5a蛋白表達(dá)在腭突發(fā)育各個(gè)主要時(shí)期的上皮和間充質(zhì)細(xì)胞中，且表達(dá)呈時(shí)空變化。在ED 15實(shí)驗(yàn)組，Wnt5a的mRNA的表達(dá)被上調(diào)且高于對(duì)照組(P<0.05)。 3、Shh和FGF-10在腭突發(fā)育的不同階段持續(xù)

5、表達(dá)，在正常對(duì)照組中Wnt5a與Shh、FGF-10表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化趨勢(shì)一致，在實(shí)驗(yàn)組Wnt5a只與FGF-10的變化趨勢(shì)具有相關(guān)性。 結(jié)論： 1、維甲酸作用于小鼠發(fā)育早期，腭突發(fā)育短小、腭突上抬障礙、舌體下降明顯延遲，兩側(cè)腭突不能在中線處接觸融合，從而導(dǎo)致腭裂的發(fā)生。 2、Wnt5a參與胚胎腭突的發(fā)生發(fā)育，在腭突發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)具有時(shí)空特異性，并與Shh和FGF-10的表達(dá)具有相關(guān)性。 3、Wnt5a