重組人粒細胞集落刺激因子的PEG修飾、純化及藥理學(xué)研究.pdf

1、目的:通過重組人粒細胞集落刺激因子(rhG-CSF)的PEG修飾、分離純化獲得單修飾的PEG-rhG-CSF,并進行藥理學(xué)研究。
　　方法:用單甲氧基聚乙二醇活性酯(mPEG20k-NHS)對rhG-CSF進行化學(xué)修飾,經(jīng)分離純化獲得PEG20K-rhG-CSF偶聯(lián)物;利用NFS60/MTT法對PEG-rhG-CSF進行體外測活;正常小鼠分別單次皮下注射高、中、低三個濃度PEG-rhG-CSF,比較各組之間藥效學(xué)的差異;環(huán)磷酰胺所

2、致外周血白細胞降低的模型小鼠分別單次皮下注射高、中、低三個濃度PEG-rhG-CSF和多次注射rhG-CSF,比較PEG-rhG-CSF各組內(nèi)及與rhG-CSF組間的藥效學(xué)差異;用NFS60/MTT法和雙抗體夾心ELISA法分別測定單次靜脈注射PEG-rhG-CSF和rhG-CSF的血藥濃度,分別比較兩組之間藥代動力學(xué)的差異。
　　結(jié)果:獲得了純度超過97％的rhG-CSF的PEG單修飾產(chǎn)物;NFS60/MTT法體外測活表明PEG

3、-rhG-CSF的體外活性與rhG-CSF相比有所下降;而在正常小鼠和病理模型小鼠的體內(nèi)藥效學(xué)研究表明PEG-rhG-CSF各組間具較明顯的量效關(guān)系且一次注射PEG-rhG-CSF與多次注射rhG-CSF的藥效作用相當;在小鼠體內(nèi)藥動學(xué)研究中,NFS60/MTT法測得的單次ivPEG-rhG-CSF和rhG-CSF的T1/2分別為13.17±1.32 h、1.98±0.25h,AUC分別為47825.65±2135.62ng·h/ml、

4、5000.57±256.33ng·h/ml,CL分別為0.000021±2.98E-06L/h·kg、0.00020±3.25E-05L/h·kg;雙抗體夾心ELISA法測得的單次ivPEG-rhG-CSF和rhG-CSF的T1/2分別為13.88±1.36 h、2.17±0.33h，AUC分別為53894.27±2327.83ng·h/ml、5709.73±275.19ng·h/ml,CL分別為0.000019±2.98E-06L/h

5、·kg、0.00018±3.25E-05L/h·kg;結(jié)果表明PEG-rhG-CSF在小鼠體內(nèi)的半衰期顯著延長,為rhG-CSF的6倍多,而兩種方法測得的半衰期接近,表明可以用雙抗體夾心ELISA法代替NFS60/MTT法來測量PEG-rhG-CSF在動物血液中的藥物濃度。
　　結(jié)論:對純化的rhG-CSF的PEG單修飾產(chǎn)物進行了藥效學(xué)和藥代動力學(xué)研究,表明PEG-rhG-CSF在動物體內(nèi)的作用時間明顯延長,藥效作用顯著增強,為研