銀杏聚戊烯醇含量分析及其合成的分子生物學研究.pdf

1、銀杏聚戊烯醇類化合物包括游離聚戊烯醇(PPs)和聚戊烯醇乙酸酯(PPAs)，是銀杏葉中除類黃酮和萜內酯外的又一類重要次生代謝產物，對人類具有重要的藥用和保健作用。目前關于銀杏聚戊烯醇的研究主要集中在成分分析和含量測定上，對于其生物合成相關酶基因的克隆與表達尚未見研究。
　　 本文以銀杏不同生長時期的葉片（5-10月份）以及不同組織器官（葉、花、果實和根）為材料，測定和分析各器官間PPs的含量，克隆銀杏PPs合成的相關基因(CPT

2、、PT、FPS)，研究銀杏PPs合成關鍵基因CPT的表達情況。主要研究結果如下:
　　 1、對銀杏不同生長時期雌雄葉片中的PPs含量進行分析，發(fā)現(xiàn)在不同生長時期雌雄葉片中均可以檢測到PPs的存在，其中雄葉的含量在320.92-1954.38μg·g-1FW之間，雌葉的含量在401.93-2291.67μg·g-1FW之間。
　　 2、對銀杏雄株不同生長時期的幼葉和老葉的PPs含量進行分析，結果表明，幼葉的含量在480.3

3、0-1961.89μg·g-1FW之間，老葉的含量在320.92-1004.03μg·g-1FW之間，不同時期均為幼葉高于老葉。
　　 3、對銀杏不同器官間的PPs含量進行分析，發(fā)現(xiàn)不同器官均檢測到PPs的存在，但含量不同。其中，根中的含量為35.73μg·g-1FW，花粉中的含量為58.05μg·g-1FW，均明顯低于果實（545.31μg·g-1FW）和葉片(1389.62μg·g-1FW)。
　　 4、以不同生長時

4、期銀杏雌株葉片為材料，比較了CTAB法、乙二醇丁醚法和改良Trizol法提取銀杏葉片RNA的效果，結果表明改良Trizol法獲得的RNA濃度和產率均較高，可滿足后續(xù)分子生物學研究。
　　 5、根據(jù)不同植物順式異戊烯基轉移酶(CPT)基因的保守區(qū)序列，設計PCR引物，采用RT-PCR和RACE技術，以銀杏葉片RNA為模板克隆獲得1210bp的CPT基因全長cDNA。該基因789bp的開放閱讀框(ORF)編碼262個氨基酸，與其他植

5、物CPT基因編碼的氨基酸有較高的同源性，被命名為GbCPT，GeneBank登錄號為JN108023。
　　 6、根據(jù)不同植物異戊烯基轉移酶(PT)基因的保守區(qū)序列，設計PCR引物，采用RT-PCR和RACE技術，以銀杏葉片RNA為模板克隆獲得1646bp的PT基因全長cDNA。該基因750bp的ORF，編碼249個氨基酸，與其他植物PT基因編碼的氨基酸有較高的同源性，被命名為GbPT，GeneBank登錄號為JQ303336。

6、
　　 7、根據(jù)GenBank中其它植物法尼基焦磷酸合成酶(FPS)基因序列設計引物，以銀杏葉片RNA為模板，采用3'-RACE方法擴增得到cDNA3'端部分序列。該cDNA3'端部分長701bp，包含一個316bp的ORF，3'端有385bp的非翻譯區(qū)(UTR)并具有完整的PolyA尾巴，編碼104個氨基酸，與其他植物FPS基因編碼的氨基酸有較高的同源性，被命名為GbFPS，GeneBank登錄號為JQ309808。