大鼠腦出血致多器官功能障礙綜合征延髓內(nèi)臟帶FOS蛋白的表達(dá)及迷走神經(jīng)的作用.pdf

1、目的:建立大鼠腦出血(CH)致多器官功能障礙綜合征(MODS)并迷走神經(jīng)切斷的動(dòng)物模型，以及大鼠腦出血并迷走神經(jīng)刺激的動(dòng)物模型，觀察模型大鼠肺、小腸、肝和腎的組織病理改變，檢測(cè)FOS蛋白在大鼠延髓內(nèi)臟帶(MVZ)迷走神經(jīng)背核、孤束核和下丘腦中的表達(dá)。探討MVZ迷走神經(jīng)背核、孤束核和下丘腦以及迷走神經(jīng)在CH致MODS中的可能存在的調(diào)控機(jī)制。 方法: 1．采用大鼠立體定位儀注射Ⅶ建立CH致MODS模型，采用膈下迷走神經(jīng)切斷法

2、阻斷迷走神經(jīng)，頸部埋置電極用以刺激迷走神經(jīng)：隨機(jī)將80只Wistar大鼠分為假手術(shù)組(n=10)對(duì)照組(n=10只)，迷走神經(jīng)切斷組(SDV組，n=10只)，腦出血組(n=20)，腦出血+迷走神經(jīng)切斷組(CH+SDV組，n=20)和腦出血+迷走神經(jīng)刺激組(CH+SIV組，n=20只)，后者又被隨機(jī)分為24h和48h時(shí)相點(diǎn)的2個(gè)亞組，每亞組各10只。 2．術(shù)后各時(shí)相點(diǎn)觀察大鼠癥狀、體征，檢測(cè)外周血WBC、肝腎功能、心肌酶學(xué)改變。光

3、鏡下觀察肺、小腸、肝和腎組織病理變化，依據(jù)盛志勇院士提出的動(dòng)物全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)和MODS的診斷標(biāo)準(zhǔn)判斷SIRS和MODS的發(fā)生率。 3．采用免疫組織化學(xué)ABC法檢測(cè)MVZ和下丘腦內(nèi)FOS蛋白表達(dá)，同時(shí)檢測(cè)Ach和NO在大鼠小腸和延髓內(nèi)臟帶中的表達(dá)，采用CMIA真彩色醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng)，觀察各時(shí)相點(diǎn)MVZ和下丘腦內(nèi)FOS蛋白表達(dá)的變化。 4．實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)

4、行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)間差異顯著性檢驗(yàn)采用t檢驗(yàn)、方差分析，以P<0.05為差異有顯著意義。 結(jié)果: 1． (1)假手術(shù)組、SDV組與正常對(duì)照組相比，其呼吸、心率、體溫及外周血WBC、ALT、AST、BUN、Cr、CK的差異無(wú)顯著意義(P>0.05)；(2)CH組和CH+SDV組的上述各項(xiàng)指標(biāo)均高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組、SDV組(P<0.01)；(3) CH+SIV組的上述各項(xiàng)指標(biāo)均高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組、SDV組(P<0

5、.05)，但較CH組和CH+SDV組低(P<0.05)；(4)CH+SDV組與CH組比較，其呼吸、心率、CK的差異無(wú)顯著意義(P>0.05)，體溫、外周血WBC、ALT、AST、BUN、Cr的差異有顯著意義(P<0.05或P<0.01)。 2．大鼠腦出血后各時(shí)相點(diǎn)各臟器組織均有不同程度的炎性損害，CH組在24h-36h時(shí)相點(diǎn)的臟器病理變化最顯著，在48h逐漸消退；CH+SDV組出血后，12h肺、小腸、肝、腎出現(xiàn)明顯的非特異性炎

6、癥反應(yīng)，在24h的臟器病理變化最顯著，48仍見(jiàn)較明顯炎癥反應(yīng)；CH+SIV組24h出現(xiàn)較明顯的非特異性炎癥反應(yīng)，36h開始逐漸消退，48h炎癥反應(yīng)不明現(xiàn)。 3．正常對(duì)照組和假手術(shù)組MVZ內(nèi)FOS陽(yáng)性表達(dá)極少，SDV組MVZ內(nèi)FOS蛋白表達(dá)略多，但與正常對(duì)照和假手術(shù)組的差異無(wú)顯著性(P>0.05)。CH組MVZ內(nèi)FOS陽(yáng)性表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組、SDV組(P<0.01)，在延髓背內(nèi)側(cè)部的孤束核、最后區(qū)、迷走神經(jīng)背運(yùn)動(dòng)核和

7、腹外側(cè)網(wǎng)狀核較密集；CH+SDV組MVZ內(nèi)FOS陽(yáng)性表達(dá)高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組，SDV組，但明顯少于CH組(P<0.01)，分布范圍局限，主要位于延髓背內(nèi)側(cè)部的孤束核和腹外側(cè)網(wǎng)狀核；CH+SIV組MVZ內(nèi)FOS陽(yáng)性表達(dá)高于正常對(duì)照組、假手術(shù)組和SDV組(P<0.01)，高于單純CH組和CH+SDV組(P<0.05)，主要位于延髓背內(nèi)側(cè)部的孤束核和腹外側(cè)網(wǎng)狀核。CH組和CH+SDV組FOS蛋白表達(dá)均在24小時(shí)達(dá)到高峰，36-48小時(shí)逐漸

8、減少。下丘腦FOS陽(yáng)性表達(dá)與MVZ內(nèi)FOS陽(yáng)性表達(dá)一致。 4．CH組，CH+SDV組和CH+SIV組SIRS的發(fā)生率均為100﹪；CH組MODS發(fā)生率為70﹪，死亡率為40﹪；CH+SDV組MODS的發(fā)生率為75.0﹪，死亡率為50﹪；CH+SIV組MODS的發(fā)生率為65.0﹪，死亡率為50.2﹪。 結(jié)論: 1．采用大鼠立體定位儀注射Ⅶ的方法可成功建立腦出血致MODS的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。 2．腦出血后存在重要

9、臟器的炎性改變及SIRS，提示SIRS是腦出血致MODS的病理學(xué)基礎(chǔ)。 3．CH后大鼠MVZ內(nèi)FOS陽(yáng)性表達(dá)增多提示MVZ參與了對(duì)CH后周圍臟器功能的調(diào)控，是CH致MODS的直接調(diào)控中樞之一。 4．膈下迷走神經(jīng)切斷增加了CH后MODS的發(fā)生率，增強(qiáng)了CH所致的周圍臟器的炎性損害；而迷走神經(jīng)刺激能減輕外周器官的炎性損害，提示迷走神經(jīng)在CH致MODS時(shí)對(duì)周圍臟器具有潛在的保護(hù)作用。 5．膈下迷走神經(jīng)切斷+腦出血組MV