趨化因子受體CXCR4在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:神經(jīng)膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤,發(fā)病率高,呈侵襲性生長(zhǎng)并且術(shù)后容易復(fù)發(fā),傳統(tǒng)的各種治療方法效果均不理想。目前神經(jīng)膠質(zhì)瘤的具體發(fā)病機(jī)制還不十分清楚。隨著對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)制的逐漸深入研究以及分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,分子靶向治療逐漸成為一種具有廣闊前景的治療新手段。
　　 已有研究表明,趨化因子SDF-1及其受體CXCR4在神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要而復(fù)雜的作用,他們能促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、引起膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生遷移、

2、加速膠質(zhì)瘤細(xì)胞的擴(kuò)散和惡變以及促進(jìn)血管生成。因此,從趨化因子及其受體的角度來(lái)研究神經(jīng)膠質(zhì)瘤的侵襲和促進(jìn)血管生成的機(jī)制,對(duì)認(rèn)識(shí)膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制、膠質(zhì)瘤的抗血管生成和分子靶向治療,具有十分重要的意義。
　　 本課題旨在通過(guò)研究趨化因子受體CXCR4在神經(jīng)膠質(zhì)瘤各病理級(jí)別中的表達(dá)情況,來(lái)分析其表達(dá)與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的侵襲性的內(nèi)在關(guān)系及其與微血管密度(MVD)的關(guān)系。
　　 方法:
　　 收集河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)外科

3、2009年10月～2010年3月經(jīng)手術(shù)治療的資料完整的38例神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者(其中男性22例,女性16例)的手術(shù)標(biāo)本,所有病人均為首發(fā)病例,術(shù)前未行放化療等治療手段,另取5例內(nèi)減壓術(shù)后的正常腦組織標(biāo)本作為對(duì)照。每一例標(biāo)本均取兩份,其中一份以4％的多聚甲醛溶液固定,常規(guī)石蠟包埋;另一份在標(biāo)本切除后馬上放到凍存管中并于液氮瓶中速凍保存。所有組織均行病理組織學(xué)檢查確診,并按照WHO(2000)神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的分類、分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床病理分期。

4、>　　 1：運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)標(biāo)本中趨化因子受體CXCR4及CD34的表達(dá)情況,并計(jì)算微血管密度值。
　　 組化結(jié)果判定方法:采用陽(yáng)性細(xì)胞百分比結(jié)合顯色強(qiáng)度法判讀結(jié)果,陽(yáng)性細(xì)胞的百分比分為以下四級(jí)計(jì)分:＜10％計(jì)0分;10～25％計(jì)1分;25～50％計(jì)2分;＞50％計(jì)3分。染色強(qiáng)度按瘤細(xì)胞深淺記分:0分,不著色;1分,弱;2分,中等;3分,強(qiáng)。將2個(gè)分值相加即得出該例標(biāo)本的免疫組化陽(yáng)性分度:0～1分為陰性,記為-;2～4

5、分為弱陽(yáng)性,記為+;5分以上為陽(yáng)性,記為++。
　　 測(cè)定微血管密度的方法:瘤組織內(nèi)任何被抗CD34抗體染成棕黃色的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇,有或無(wú)管腔,只要與其它結(jié)締組織成分有明顯區(qū)別,均計(jì)為1個(gè)陽(yáng)性血管標(biāo)記,每例觀察切片1張,避開(kāi)腫瘤壞死或出血區(qū)域,在低倍鏡(×40)下選擇微血管最豐富區(qū),即“熱點(diǎn)”("hot spot"),在高倍視野(×200)下計(jì)數(shù),計(jì)數(shù)5個(gè)200倍視野下的血管數(shù),在目鏡網(wǎng)格測(cè)微尺0.25mm2的范圍內(nèi)計(jì)

6、數(shù),其算術(shù)平均數(shù)計(jì)為該例切片的MVD測(cè)定值。
　　 2：運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法測(cè)定標(biāo)本中趨化因子受體CXCR4在膠質(zhì)瘤組織中的相對(duì)表達(dá)量。
　　 采用Trizol法提取總RNA,行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),采用分光光度計(jì)檢測(cè)RNA純度。mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA并進(jìn)行檢測(cè),以β-actin作為內(nèi)參照,使用嚴(yán)格的復(fù)孔法測(cè)定。
　　 3：統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 根據(jù)數(shù)據(jù)采集的不同方法及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理的不同要求,所有計(jì)量資

7、料均用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示,選用x2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法,使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P＜0.05表示差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.01表示差異有非常顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1：免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示趨化因子受體CXCR4在正常腦組織中表達(dá)陰性,CXCR4在其中的24例膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)呈陽(yáng)性,總陽(yáng)性表達(dá)率為63.16％,在低級(jí)別(Ⅱ級(jí))和高級(jí)別(Ⅲ、Ⅳ級(jí))膠質(zhì)瘤組的陽(yáng)性表達(dá)率分別為44

8、.44％、80.00％。CXCR4陽(yáng)性表達(dá)率隨著膠質(zhì)瘤病理級(jí)別的增高而呈上升趨勢(shì),且高級(jí)別組CXCR4的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于低級(jí)別組,差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2：以CD34單克隆抗體標(biāo)記的微血管密度(MVD)在正常腦組織和腦膠質(zhì)瘤組中的表達(dá)均值分別為3.76±0.48和35.25±9.75,MVD的表達(dá)在腦膠質(zhì)瘤組明顯高于正常腦組織組,差異具有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);在低級(jí)別膠質(zhì)瘤組和高級(jí)別

9、膠質(zhì)瘤組中的表達(dá)均值分別為27.38±5.04和42.34±7.12,MVD在高級(jí)別膠質(zhì)瘤組的表達(dá)明顯高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤組,差異具有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 3：MVD在14例CXCR4表達(dá)陰性的膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)均值為26.37±5.11,在24例CXCR4表達(dá)陽(yáng)性的膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)均值為40.43±7.88,通過(guò)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)可知MVD在CXCR4表達(dá)陰性和陽(yáng)性的膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)均值具有非常顯著的差異(P＜0

10、.01)。
　　 4：實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示趨化因子受體CXCR4mRNA在低級(jí)別(Ⅱ級(jí))膠質(zhì)瘤組中的相對(duì)正常腦組織組的表達(dá)量為2.22±0.80,在高級(jí)別(Ⅲ、Ⅳ級(jí))膠質(zhì)瘤組的相對(duì)正常腦組織組的表達(dá)量為4.03±1.98,趨勢(shì)是隨膠質(zhì)瘤病理級(jí)別的增高而升高,差別具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1：趨化因子受體CXCR4在正常腦組織中表達(dá)呈陰性,而在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)陽(yáng)性,表明C

11、XCR4可能與膠質(zhì)瘤的侵襲性有關(guān)。
　　 2：在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中,趨化因子受體CXCR4在蛋白水平和分子水平均有高表達(dá),且隨病理級(jí)別的升高而表達(dá)增加,說(shuō)明CXCR4可能與膠質(zhì)瘤的惡性程度相關(guān)。
　　 3：在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中,能反映新生血管增加的MVD值隨著病理級(jí)別的增加而增加,提示腦膠質(zhì)瘤的血管生成與瘤內(nèi)的MVD關(guān)系密不可分;MVD愈高,腫瘤的血管生成愈多,腫瘤的惡性程度愈高。驗(yàn)證了MVD是判定腫瘤惡性程度和預(yù)后的重要指