多西環(huán)素對(duì)鼠退變椎間盤中金屬蛋白酶抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、椎間盤的退行變已經(jīng)是直接或間接引起腰背部疼痛的病因，而且其患病率很高，嚴(yán)重影響中年人群生活質(zhì)量?，F(xiàn)在大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，椎間盤退變的主要由間盤所在的生物力學(xué)和生物學(xué)環(huán)境共同作用的結(jié)果。很多學(xué)者都在研究通過(guò)促進(jìn)間盤基質(zhì)合成和／或抑制降解酶活性的分子阻止間盤退變或使間盤細(xì)胞再生來(lái)治療腰椎間盤退變引起的慢性腰痛疾病。多西環(huán)素是四環(huán)素類抗生素，可以抑制間盤退變中的關(guān)鍵酶MMPs的mRNA表達(dá)及通過(guò)與酶活性位點(diǎn)結(jié)合直接抑制MMPs的活性，它已被廣泛用

2、于腹主動(dòng)脈瘤、缺血再灌注損傷、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疾病預(yù)防治療的實(shí)驗(yàn)研究中，但還未見它應(yīng)用到間盤退變中報(bào)道。我們實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖窃谕俗冮g盤中使用多西環(huán)素，觀察它是否可以抑制MMP-3和MMP-13的表達(dá)，繼而阻止間盤的退變。 方法: 1、動(dòng)物的來(lái)源純種成年SD大鼠60只，雌雄不限，由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物部提供并飼養(yǎng)。 2、退變模型的建立辨別大鼠第10尾椎間盤，在相鄰的兩尾椎上穿入交叉的克氏針，并在上下椎體對(duì)應(yīng)的克氏針上綁上彈力帶

3、，使其均勻加壓并使其壓強(qiáng)達(dá)到1.3MPa，固定后可以自由活動(dòng)，7天后間盤退變解除固定，分別在固定間盤中注入多西環(huán)素和生理鹽水，術(shù)后1周和2周分別取材。 3、HE染色和Western blot檢測(cè)采用HE染色觀察術(shù)后1周間盤退變的情況。 采用Western blot檢測(cè)術(shù)后2周退變間盤中MMP-3和MMP-13表達(dá)量。 結(jié)果: 1、HE染色結(jié)果術(shù)后第7天，髓核細(xì)胞和胞外基質(zhì)明顯減少，有部分髓核細(xì)胞出現(xiàn)調(diào)亡現(xiàn)

4、象，纖維環(huán)斷裂，終板軟骨陷凹增大。 2、Western blot檢測(cè)結(jié)果術(shù)后第14天，注入生理鹽水組MMP-3，MMP-13表達(dá)量明顯高于注入多西環(huán)素組MMP-3，MMP-13的表達(dá)，他們之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 討論: 1、退變動(dòng)物模型的建立HE染色證實(shí)我們采用的方法使鼠尾椎動(dòng)物模型已經(jīng)達(dá)到其間盤退變的目的，為研究間盤退變疾病的治療提供了良好基礎(chǔ)。 2、Western blot檢測(cè)結(jié)果的分析我