早花檸檬和四倍體檸檬轉(zhuǎn)GFP基因新種質(zhì)的創(chuàng)制.pdf

1、檸檬作為世界第一大果樹(shù)——柑橘的重要的類(lèi)型，不僅具有很高的食用價(jià)值，而且在基礎(chǔ)研究方面有著極高的研究?jī)r(jià)值。利用短童期的種質(zhì)資源以加快研究進(jìn)程，一直是柑橘分子生物學(xué)研究的重要課題。而短童期的檸檬是柑橘遺傳轉(zhuǎn)化的優(yōu)良材料。
　　本研究利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，以早花檸檬和四倍體費(fèi)米耐勞檸檬上胚軸為外植體，以綠色熒光蛋白基因(GFP)為目的基因，進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，最終獲得了純合的GFP穩(wěn)定表達(dá)的陽(yáng)性苗。主要結(jié)果如下:
　　1.早花檸檬上胚

2、軸切段轉(zhuǎn)化GFP基因，共轉(zhuǎn)化上胚軸4批，1699個(gè)莖段，平均生芽率為67.0％。生芽篩選培養(yǎng)后，經(jīng)體視熒光顯微鏡鑒定，共有33個(gè)陽(yáng)性芽，轉(zhuǎn)化率為1.94％。第一批轉(zhuǎn)化獲得的8個(gè)轉(zhuǎn)化子生根誘導(dǎo)3個(gè)月仍未生根，微芽嫁接后未成活，表明早花檸檬生根難度較大。后3批已鑒定的陽(yáng)性芽目前處于伸長(zhǎng)階段。
　　2.四倍體費(fèi)米耐勞檸檬上胚軸切段轉(zhuǎn)化GFP基因，共轉(zhuǎn)化上胚軸9批，5131個(gè)莖段，平均生芽率為64.4％。經(jīng)熒光顯微鏡檢測(cè)，共有290個(gè)再生