異硫氰酸芐酯(BITC)下調(diào)Mcl-1誘導(dǎo)人白血病細胞凋亡和細胞周期阻滯的分子機制研究.pdf

1、白血病是嚴重危害人類健康的造血系統(tǒng)惡性腫瘤,尋找新的治療白血病的策略成為目前關(guān)注的焦點。天然植物中分離的活性成分是抗腫瘤藥物的重要來源,人們從天然植物中分離到多種抗腫瘤活性成分,這些活性成分針對特異性的分子靶點調(diào)控細胞增殖、分化和凋亡,從而抑制腫瘤細胞生長。異硫氰酸芐酯(benzylisothiocyanate,BITC)是一種具有抑制腫瘤細胞生長的天然物質(zhì),存在于十字花科植物中,屬于異硫氰酸酯類化合物。近年來,由于其顯著的抗癌作用,成

2、為抗癌藥物研究的熱點。
　　抗凋亡蛋白Mcl-1為Bcl-2家族成員之一,在細胞發(fā)育和分化過程中起著重要作用,具有很短的半衰期。在轉(zhuǎn)錄翻譯以及蛋白降解等多個環(huán)節(jié),Mcl-1基因的表達均可受到調(diào)控,在不同的因素作用下表現(xiàn)為不同的分子機制。白血病細胞和其它實體瘤細胞中常有Mcl-1高表達,體外實驗發(fā)現(xiàn)Mcl-1的下調(diào)可引起多種腫瘤細胞細胞凋亡。多項研究說明Mcl-1與白血病的發(fā)生有密切聯(lián)系,Mcl-1在其中可能起著重要的作用。但其具體

3、作用機制尚不清楚。因此深入研究異硫氰酸芐酯誘導(dǎo)Mcl-1下調(diào)的分子機制,明確其作用的分子靶點,對于腫瘤的預(yù)防和治療具有重要意義。
　　本文利用Jurkat、HL60、U937等多種白血病細胞株、臨床白血病人細胞以及裸鼠異種移植瘤模型,采用流式細胞術(shù)、免疫沉淀、免疫印跡、抑制劑和分子克隆干擾等方法深入研究BITC誘導(dǎo)多種人白血病細胞以及臨床病人白血病細胞凋亡與細胞周期阻滯的機制;探索BITC對Mcl-1基因轉(zhuǎn)錄、翻譯以及蛋白泛素化過

4、程的影響,明確Mcl-1在其中的分子機制。通過研究,我們發(fā)現(xiàn)BITC明顯誘導(dǎo)白血病細胞線粒體損傷和凋亡,并促使caspase途徑激活,細胞色素C的釋放,AIF的核聚集,Bax的轉(zhuǎn)位和Mcl-1蛋白的下調(diào),且呈現(xiàn)明顯的時效和量效關(guān)系。BITC將細胞阻滯在G2/M期,并且阻滯于該期的細胞,對Mcl-1的下調(diào)和BITC誘導(dǎo)的凋亡也更加敏感。我們還采用RT-PCR,脈沖追蹤,報告基因分析等實驗,證實了相對于轉(zhuǎn)錄水平,翻譯后水平和caspase途