動(dòng)脈粥樣硬化microRNA表達(dá)譜的研究.pdf

1、目的：
　　篩選出動(dòng)脈粥樣硬化患者與正常對(duì)照者之間差異表達(dá)microRNA(miRNA),為了解miRNA在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中的作用及課題組進(jìn)一步研究miRNA靶向調(diào)節(jié)ⅡA型分泌型磷脂酶A2(sPLA2-ⅡA)表達(dá)在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中的作用奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、收集廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院心血管內(nèi)科門診與病房確診的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者3例，健康對(duì)照者3例。所有病例均在胸痛等癥狀發(fā)作后48小時(shí)內(nèi)采集外周血液

2、，分離血清。
　　2、抽提樣本總RNA，用標(biāo)記酶將Hy3TM或Hy5TM熒光集團(tuán)標(biāo)記質(zhì)檢合格的RNA,采用Exiqon公司的microRNA芯片進(jìn)行檢測(cè)，篩選出差異表達(dá)的miRNAs。
　　3、為了進(jìn)一步驗(yàn)證microRNA芯片結(jié)果的可靠性，挑選出11個(gè)具有代表性的差異表達(dá)miRNAs分子：過(guò)表達(dá)的hsa-miR-3655、hsa-miR-548ac、hsa-miR-96-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-107、h

3、sa-miR-15b-3p、hsa-miR-126-3p，低表達(dá)的hsa-miR-4682、hsa-miR-610、hsa-miR-504-5p、hsa-miR-186-3p。采用實(shí)時(shí)定量PCR方法進(jìn)行驗(yàn)證，用hsa-miR-423-5p作為內(nèi)參，所得數(shù)據(jù)采用2-ΔΔCT方法進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：
　　1、用microRNA芯片篩選出差異表達(dá)顯著改變(上調(diào)或下調(diào)2倍以上)的miRNAs分子232個(gè)，其中過(guò)表達(dá)2倍以上的的mi

4、RNAs分子134個(gè)，過(guò)表達(dá)5倍以上的miRNAs分子15個(gè)，過(guò)表達(dá)10倍以上的miRNAs分子1個(gè)，為hsa-miR-548ac；低表達(dá)2倍以上的miRNAs分子98個(gè)，低表達(dá)5倍以上的miRNAs分子20個(gè)，低表達(dá)10倍以上的miRNAs分子3個(gè)為hsa-miR-3155a、hsa-miR-3158-3p、hsa-miR-371b-5p。總體上動(dòng)脈粥樣硬化患者與正常對(duì)照者之間差異性表達(dá)顯著。
　　2、我們挑選出的11個(gè)具有代表

5、性的差異表達(dá)miRNAs分子，過(guò)表達(dá)的hsa-miR-3655、hsa-miR-548ac、hsa-miR-96-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-107、hsa-miR-15b-3p、hsa-miR-126-3p，低表達(dá)的hsa-miR-4682、hsa-miR-610、hsa-miR-504-5p、hsa-miR-186-3p，經(jīng)實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證，結(jié)果與芯片結(jié)果基本吻合。
　　結(jié)論：
　　1、動(dòng)脈粥樣硬化患者與

6、正常對(duì)照者之間miRNAs差異表達(dá)顯著，建立了動(dòng)脈粥樣硬化miRNAs的完整表達(dá)譜。為探討miRNA在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中的作用提供有效和準(zhǔn)確的分子學(xué)依據(jù)。
　　2、通過(guò)運(yùn)用microRNA芯片篩選出動(dòng)脈粥樣硬化差異表達(dá)miRNAs，并經(jīng)實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證，結(jié)果與microRNA芯片表達(dá)趨勢(shì)一致，說(shuō)明microRNA芯片結(jié)果真實(shí)可靠，可用于后續(xù)研究。
　　3、為下一步研究miRNA靶向調(diào)節(jié)sPLA2-ⅡA表達(dá)在動(dòng)脈粥樣硬化