β胡蘿卜素在香煙煙霧溶液誘導(dǎo)人肺細(xì)胞DNA損傷中的作用.pdf

1、本研究以ATBC和CARET人群干預(yù)試驗(yàn)為背景，結(jié)合γH2AX反映DNA損傷的特性，采用γH2AX熒光抗體識(shí)別技術(shù)，探討不同劑量的β-胡蘿卜素在香煙煙霧溶液誘導(dǎo)人肺細(xì)胞DNA損傷中的不同作用，目的是為全面評(píng)價(jià)β-胡蘿卜素的安全性，合理補(bǔ)充β-胡蘿卜素提供科學(xué)依據(jù)。 研究方法：本研究采用體外實(shí)驗(yàn)的方法。選用A549細(xì)胞，選定合適的香煙煙霧溶液(CSS)濃度及作用時(shí)間，建立CSS對(duì)細(xì)胞損傷的模型。設(shè)置β-胡蘿卜素各劑量組，在細(xì)胞培養(yǎng)

2、48h后，加入不同濃度的含β-胡蘿卜素的培養(yǎng)液，同時(shí)設(shè)立0.5％DMSO作為溶劑對(duì)照組，培養(yǎng)24h后，加入CSS作用1h，并且設(shè)立0.5mmol/L雙氧水作為陽性對(duì)照組，采用γH2AX抗體識(shí)別免疫熒光技術(shù)，一抗選用鼠源γH2AX單抗，二抗選用山羊抗鼠FITC標(biāo)記的抗體，用免疫熒光顯微鏡定性及半定量檢測(cè)，用流式細(xì)胞技術(shù)定量熒光強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)每組設(shè)立三個(gè)平行孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。免疫熒光顯微鏡圖片用ImageProPlus軟件進(jìn)行γH2AX焦點(diǎn)定量

3、計(jì)數(shù)，結(jié)果采用CMH卡方檢驗(yàn)；流式細(xì)胞熒光強(qiáng)度結(jié)果用陽性細(xì)胞數(shù)和平均熒光強(qiáng)度表示。 研究結(jié)果： 免疫熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)γH2AX焦點(diǎn)數(shù)目結(jié)果顯示：空白組和單獨(dú)各濃度β-胡蘿卜素濃度組與溶劑對(duì)照組相比沒有顯著性差異，表明單獨(dú)β-胡蘿卜素不能引起A549細(xì)胞產(chǎn)生DNA損傷；0.1支/ml的CSS與對(duì)照組相比有顯著性差異，表明單獨(dú)的CSS能引起A549細(xì)胞產(chǎn)生DNA損傷；0.1μmol/Lβ-胡蘿卜素+CSS組與單獨(dú)CSS

4、組相比不具有顯著性差異，表明該濃度的β-胡蘿卜素對(duì)由0.1支/mlCSS誘導(dǎo)A549細(xì)胞產(chǎn)生的DNA損傷沒有明顯影響；0.5～10.0μmol/Lβ-胡蘿卜素+CSS組與單獨(dú)CSS組誘導(dǎo)的A549細(xì)胞DNA損傷具有顯著性差異，而且這種差異經(jīng)CMH卡方趨勢(shì)檢驗(yàn)，也有顯著性，表明0.5～10.0μmol/Lβ-胡蘿卜素對(duì)由CSS誘導(dǎo)的A549細(xì)胞產(chǎn)生的DNA損傷具有促進(jìn)作用，且隨著β-胡蘿卜素濃度的增加促進(jìn)作用增強(qiáng)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)陽性細(xì)胞數(shù)