酮基類胡蘿卜素的檢測(cè)、代謝研究及對(duì)HaCaT細(xì)胞紫外線損傷的作用.pdf

1、研究在裝備了二極管陣列檢測(cè)器(PDA)的高壓液相色譜(HPLC)上,應(yīng)用C18、C30柱子分離與鑒定酮基類胡蘿卜素的方法：分析北京市場(chǎng)上的5種食用蝦中酮基類胡蘿卜素的含量與組成；探索酮基類胡蘿卜素在大鼠體內(nèi)器官以及血清中的積累情況；研究酮基類胡蘿卜素對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCaT)增殖的影響；研究酮基類胡蘿卜素在長(zhǎng)波紫外線(UVA)和中波紫外線(UVB)照射后HaCaT細(xì)胞損傷中的防治作用。 方法： C18色譜柱為Diam

2、onsilTM,流動(dòng)相為酸性乙腈-水、乙酸乙酯,線性梯度洗脫,流速1.0 ml.min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)480nm,波長(zhǎng)范圍280-580nm,進(jìn)樣量20μl;C30色譜柱為Waters YMC Carotenoid S-5,流動(dòng)相酸性乙腈.水、甲基叔丁基醚,線性梯度洗脫,流速1.0ml.min-1,檢測(cè)波長(zhǎng)480nm,波長(zhǎng)范圍250nm-600nm,進(jìn)樣量20μl。 酮基類胡蘿卜素灌胃雄性SD大鼠后收集其血清、臟器及糞便,萃取其中

3、的酮基類胡蘿卜素組分,C30-HPLC-PDA對(duì)萃取物進(jìn)行分離并測(cè)其幾何異構(gòu)體的組成。 分別用一定劑量的UVA和UVB照射HaCaT細(xì)胞,立即加入含有酮基類胡蘿卜素的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)后檢測(cè)細(xì)胞上清液中乳酸脫氫酶水平,通過(guò)MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,并與單照射UVA或UVB的對(duì)照組及未照UV也未加酮基類胡蘿卜素的空白組進(jìn)行比較。 結(jié)果： 應(yīng)用C18-HPLC-PDA和C30-HPLC-PDA酸性流動(dòng)相中,酮基

4、類胡蘿卜素得到了良好的分離,可以利用此法鑒定酮基類胡蘿卜素。 蝦青素單體在大鼠血清中及脾臟中均有積累。斑蝥黃質(zhì)在大鼠體內(nèi)的消化、吸收、血液運(yùn)輸和肝臟代謝中,未發(fā)現(xiàn)順式異構(gòu)體比例的上升。灌胃2小時(shí)后大鼠血清中斑蝥黃質(zhì)的積累達(dá)到最高水平。 酮基類胡蘿卜素能顯著提高HaCaT細(xì)胞的增殖率,能降低UV輻照后細(xì)胞上清液中的乳酸脫氫酶水平。 結(jié)論： 通過(guò)比較色譜行為和光譜特征,酮基類胡蘿卜素類化合物可被鑒定,這使C1