基于IL-6-STAT3-SOCS3通路研究清腸化濕方治療潰瘍性結(jié)腸炎作用機(jī)制.pdf

1、目的：本研究圍繞白細(xì)胞介素-6/Janus激酶2/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3/細(xì)胞因子抑制因子3(Interleukin-6/Janus kinase2/Signal transducer and activator of transcription3/Suppressor of cytokine signaling3，IL-6/STAT3/SOCS3)通路，觀察清腸化濕方對(duì)IL-6/STAT3/SOCS3通路及相關(guān)分子的調(diào)節(jié)，探討該方治

2、療潰瘍性結(jié)腸炎的作用機(jī)制。
　　方法：體外實(shí)驗(yàn):予hTNF-α、LPS聯(lián)合刺激誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞炎癥模型，將細(xì)胞隨機(jī)分為6組，對(duì)照組，模型組，柳氮磺胺毗啶(Sulfasalazine，SASP)組，清腸化濕方高劑量組、清腸化濕方中劑量組、清腸化濕方低劑量組。ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-6的含量，Real TimePCR法檢測(cè)細(xì)胞JAK2、STAT3、SOCS3mRNA相對(duì)表達(dá)水平，Western Blot法檢測(cè)細(xì)胞p-JAK

3、2、p-STAT3、SOCS3蛋白的表達(dá)情況。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):用TNBS/無(wú)水乙醇制備小鼠結(jié)腸炎模型，40只小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、SASP組、清腸化濕方組，連續(xù)給藥7d后，取新鮮結(jié)腸標(biāo)本，觀察黏膜大體形態(tài)及組織學(xué)改變，ELISA法檢測(cè)可溶性白細(xì)胞介素6受體(soluble interleukin6 receptor，sIL-6R)含量，Real Time PCR法檢測(cè)IL-6、糖蛋白130(glycoprotein130,gp130)、

4、JAK2、STAT3、SOCS3mRNA相對(duì)表達(dá)水平，Western Blot法觀察結(jié)腸黏膜IL-6、gp130、p-JAK2、p-STAT3、SOCS3蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：體外實(shí)驗(yàn):與對(duì)照組相比，模型組細(xì)胞上清IL-6水平、細(xì)胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表達(dá)水平增高，SOCS3 mRNA和蛋白表達(dá)增加。與模型組相比，清腸化濕方各劑量組細(xì)胞上清IL-6水平、p-JAK2、p-STAT3蛋白表達(dá)明顯降低(P＜0.01)

5、，呈劑量依賴性，清腸化濕方高、中劑量組SOCS3 mRNA和蛋白表達(dá)較模型組上調(diào)(P＜0.01)。各組JAK2、STAT3mRNA表達(dá)未見(jiàn)明顯差異(P＞0.05)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):清腸化濕方對(duì)模型小鼠結(jié)腸大體形態(tài)及病理學(xué)評(píng)分均有改善作用。與對(duì)照組相比，模型組結(jié)腸上清sIL-6R含量，結(jié)腸IL-6、gp130、SOCS3 mRNA和蛋白表達(dá)均明顯增高，p-JAK2、p-STAT3蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0.01)，清腸化濕方組sIL-6R含量，IL-

6、6、gp130mRNA和蛋白表達(dá)下調(diào)，p-JAK2、p-STAT3蛋白表達(dá)下調(diào)(P＜0.01)，SOCS3 mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0.01)。各組JAK2、STAT3 mRNA表達(dá)未見(jiàn)明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論：體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明清腸化濕方可能通過(guò)上調(diào)HT-29細(xì)胞SOCS3，抑制JAK2、STAT3的活化，降低IL-6的分泌。體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果表明清腸化濕方對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎有一定的改善作用，機(jī)制可能與上調(diào)SOCS3，抑