補(bǔ)腎益氣方藥治療肺腎氣（陽）虛型哮喘的現(xiàn)代臨床及實驗研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一章 肺腎氣（陽）虛型哮喘患者炎癥與HPA軸功能狀態(tài)及相關(guān)性研究
　　目的:通過對比不同中醫(yī)辨證分型的哮喘患者及正常健康人的血清、誘導(dǎo)痰、唾液、尿液中有關(guān)氣道炎癥、HPA軸功能的指標(biāo)，擬明確肺腎氣（陽）虛型哮喘患者炎癥及HPA軸功能狀態(tài)，為補(bǔ)腎益氣方藥干預(yù)哮喘的內(nèi)在機(jī)理研究提供依據(jù)。
　　方法:選取年齡18-65歲，性別不限，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)診斷為哮喘，中醫(yī)辨證為肺腎氣（陽）虛、肺氣虛、

2、陰虛火旺證;另選取年齡、性別匹配的健康人群作為對照組。同時排除合并肺部其他疾病的患者;一個月內(nèi)使用糖皮質(zhì)激素治療的患者。在固定時間點(diǎn)采集所有研究對象外周血、誘導(dǎo)痰、唾液、24h尿液，用Bio-Plex懸液芯片檢測痰上清液和血清中白細(xì)胞介素(Interleukin，IL)-6、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor，TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(Transforming GrowthFactor-β，TGF-β)、

3、干擾素-γ(Interferon-γ，IFN-γ)水平等以觀察炎癥情況;同時用放射免疫法檢測血漿及唾液皮質(zhì)醇，24h尿游離皮質(zhì)醇(Urinary Free Cortisol，UFC)、17-羥皮質(zhì)類固醇（尿17-羥）、17-酮類固醇（尿17-酮）等指標(biāo)以評估HPA軸功能。
　　結(jié)果:本研究共收集71例哮喘患者，其中肺腎氣（陽）虛組28例，肺氣虛組23例，陰虛火旺組20例，另選取41名健康體檢者作為正常組。各組患者性別、年齡、體重指

4、數(shù)、吸煙、病程、疾病嚴(yán)重程度均無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。與正常組、肺氣虛組比較，肺腎氣（陽）虛組、陰虛火旺組血清TNF-α水平明顯升高，而IFN-γ明顯降低(P＜0.05)，肺腎氣（陽）虛組IL-6水平明顯高于其他三組(P＜0.05)。與正常組、肺氣虛組比較，肺腎氣（陽）虛組誘導(dǎo)痰中TNF-α、TGF-β水平明顯升高(P＜0.05)，陰虛火旺組誘導(dǎo)痰IFN-γ明顯降低(P＜0.05)。肺腎氣（陽）虛組尿游離皮質(zhì)醇、17-羥水平明顯低

5、于其他三組，尿17-酮明顯低于正常組及陰虛火旺組。與正常組、陰虛火旺組相比，肺腎氣（陽）虛組晨8點(diǎn)及次日8點(diǎn)血皮質(zhì)醇明顯降低(P＜0.05);與正常組比較，肺腎氣（陽）虛組晨8點(diǎn)及次日8點(diǎn)唾液皮質(zhì)醇明顯降低(P＜0.05)，與陰虛火旺組比較，肺腎氣（陽）虛組次日晨8點(diǎn)唾液皮質(zhì)醇明顯降低(P＜0.05);肺氣虛組亦出現(xiàn)血漿及唾液中晨8點(diǎn)及次日8點(diǎn)皮質(zhì)醇水平降低，但與正常組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。血清TNF-α、IL-6與血漿皮質(zhì)醇呈明顯的負(fù)相關(guān)

6、(r=-0.26，P=0.03)、(r=-0.25，P=0.03)，誘導(dǎo)痰IL-6與唾液皮質(zhì)醇呈明顯的負(fù)相關(guān)(r=-0.26，P=0.02)。血清IFN-γ與尿17-羥呈明顯的正相關(guān)(r=0.21，P=0.03)。
　　結(jié)論:哮喘患者致炎因子增多，抑炎因子缺乏，處于致炎/抑炎平衡調(diào)控機(jī)制失衡狀態(tài)，其中以肺腎氣（陽）虛型哮喘患者改變尤為明顯，可能與其HPA軸功能低下或紊亂有關(guān)。
　　第二章 補(bǔ)腎益氣方藥治療肺腎氣（陽）虛型哮喘

7、的臨床療效觀察及內(nèi)在機(jī)理探討
　　目的:通過多中心、隨機(jī)、雙盲的臨床試驗，驗證并對比補(bǔ)腎防喘片與補(bǔ)腎益氣方治療肺腎氣（陽）虛型哮喘的療效，并從炎癥、HPA軸功能角度出發(fā)探討其內(nèi)在機(jī)理，為臨床應(yīng)用提供循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。
　　方法:采用前瞻性、多中心、雙盲的隨機(jī)對照試驗方法。受試對象來源于5家三級甲等醫(yī)院門診與病房，采用相同的入選和排除標(biāo)準(zhǔn)，將符合標(biāo)準(zhǔn)的哮喘患者隨機(jī)分為補(bǔ)腎防喘片組、補(bǔ)腎益氣方組、安慰劑組，三組在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)治療上，

8、分別加用補(bǔ)腎防喘片與補(bǔ)腎益氣方模擬劑、補(bǔ)腎益氣方與補(bǔ)腎防喘片模擬劑、補(bǔ)腎益氣方模擬劑與補(bǔ)腎防喘片模擬劑，觀察周期為3個月。
　　結(jié)果:(1)最終共納入符合標(biāo)準(zhǔn)的患者295例。三組病例治療前資料具有可比性(P＞0.05)。
　　(2)三組服藥前后安全性指標(biāo)組間比較，P＞0.05，不良事件/不良反應(yīng)發(fā)生率組間比較，P＞0.05，無嚴(yán)重不良事件報告。
　　(3)補(bǔ)腎防喘片、補(bǔ)腎益氣方治療后血EOS明顯下降，但與安慰劑組比較，

9、無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05);補(bǔ)腎益氣方治療后血清t IgE有明顯下降趨勢，而補(bǔ)腎防喘片組、安慰劑組治療后升高，組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05);補(bǔ)腎益氣方治療后IL-2、IL-10水平升高，與補(bǔ)腎防喘片組、安慰劑組比較，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.006，P=0.04);補(bǔ)腎益氣方、補(bǔ)腎防喘片服藥后血清中IFN-γ水平降低，與安慰劑組比較，有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.01);補(bǔ)腎益氣方、補(bǔ)腎防喘片治療后血清MMP-9、IL-4、IL-5、

10、IL-13、IL-17水平較服藥前均有明顯下降，且下降幅度比安慰劑組明顯，但組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05);補(bǔ)腎益氣方治療后血漿CRH、ACTH、皮質(zhì)醇水平均有明顯升高，補(bǔ)腎防喘片治療后血漿ACTH水平亦有升高的趨勢，而安慰劑組治療后均下降。
　　結(jié)論:補(bǔ)腎防喘片可顯著升高FEV1占預(yù)計值％，補(bǔ)腎益氣方亦有改善FEV1占預(yù)計值％的趨勢;觀察期間由于各組均在吸入糖皮質(zhì)激素治療的基礎(chǔ)上，補(bǔ)腎防喘片和補(bǔ)腎益氣方減少哮喘急性發(fā)作的作

11、用不明顯，但補(bǔ)腎益氣方與補(bǔ)腎防喘片治療后均有改善肺功能，提高哮喘控制水平，減輕日間哮喘癥狀，提高生活質(zhì)量，改善肺腎氣（陽）虛證候的作用;機(jī)理研究表明降低致炎因子水平，升高抑炎因子水平，糾正致炎/抑炎平衡調(diào)控機(jī)制失衡，改善HPA軸功能，提高內(nèi)在抗炎能力可能是補(bǔ)腎防喘片、補(bǔ)腎益氣方治療肺腎氣（陽）虛型哮喘的內(nèi)在機(jī)理;補(bǔ)腎防喘片與補(bǔ)腎益氣方是治療哮喘安全可靠的中成藥，值得在臨床上推廣應(yīng)用。
　　第三章 補(bǔ)腎益氣方藥治療肺腎氣（陽）虛型哮

12、喘的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究
　　目的:利用HPLC-ESI/Q-TOF-MS/MS快速鑒別補(bǔ)腎防喘片中化學(xué)成分，結(jié)合動物實驗研究，初步明確補(bǔ)腎益氣方藥治療肺腎氣（陽）虛型哮喘的活性成分。
　　方法:1.補(bǔ)腎防喘片中化學(xué)成分鑒別:采用Agilent Poroshell120-C18反相色譜柱，以乙腈-0.1％甲酸為流動相梯度洗脫;質(zhì)譜使用ESI，在正離子、負(fù)離子、紫外線模式下采集數(shù)據(jù)。
　　2.淫羊藿苷對社交應(yīng)激性“恐傷腎”致

13、肺腎氣虛哮喘小鼠的干預(yù)作用及內(nèi)在機(jī)制探討:將45只Balb/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字法分為5組，每組9只，即正常組、“恐傷腎”致肺腎氣虛哮喘組、地塞米松干預(yù)組、低劑量淫羊藿苷干預(yù)組、高劑量淫羊藿苷干預(yù)組。各用藥組分別在OVA霧化前30min灌胃給藥，連續(xù)14天。檢測指標(biāo)同第三章方法2。
　　結(jié)果:1.通過正、負(fù)離子質(zhì)譜信息及元素組成分析并結(jié)合對照品及相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對照，共鑒定出淫羊藿苷等18個化學(xué)成分;
　　2.曠場試驗結(jié)果顯示，與肺

14、腎氣虛哮喘模型組比較，淫羊藿苷組小鼠中央格停留時間延長(P＜0.05)，垂直活動增加(P＜0.05)，水平運(yùn)動、糞便次數(shù)明顯減少(P＜0.05)，地塞米松干預(yù)亦有類似作用，但不如高劑量淫羊藿組改善明顯;肺功能結(jié)果提示，與肺腎氣虛哮喘組比較，淫羊藿苷與地塞米松干預(yù)組，在Mch高濃度激發(fā)時，RL明顯下降(P＜0.05)，其中以高劑量淫羊藿苷RL下降最明顯;淫羊藿苷與地塞米松治療組可抑制肺腎氣虛哮喘組血清及BALF中炎癥因子水平的升高(P＜0

15、.05)，高劑量淫羊藿苷與地塞米松作用相當(dāng)或優(yōu)于地塞米松，但兩組之間無統(tǒng)計學(xué)差異;淫羊藿苷與地塞米松干預(yù)可抑制肺腎氣虛哮喘組血清皮質(zhì)酮水平升高(P＜0.05);淫羊藿苷與地塞米松干預(yù)可明顯減輕肺腎氣虛哮喘組氣道炎細(xì)胞浸潤、水腫、上皮損傷情況(P＜0.05)，其中以高劑量淫羊藿苷改善最明顯;淫羊藿苷治療組小鼠體外LPS誘導(dǎo)的脾臟單個核細(xì)胞增殖及分泌的細(xì)胞因子能被高濃度皮質(zhì)酮所抑制，而地塞米松干預(yù)組此作用不明顯;淫羊藿苷干預(yù)后肺組織GR m

16、RNA與GR蛋白表達(dá)水平顯著升高(P＜0.01)，呈劑量依賴性，而地塞米松治療組有升高肺腎氣虛哮喘組小鼠肺組織GR蛋白表達(dá)的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:1.通過高效液相色譜分離，質(zhì)譜測定相對分子質(zhì)量及相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)檢索確定補(bǔ)腎防喘片中的18種化學(xué)成分，其中淫羊藿苷等5種單體成分來自補(bǔ)腎中藥淫羊藿，這為闡明補(bǔ)腎益氣方藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了證據(jù)。
　　2.淫羊藿苷對肺腎氣虛哮喘小鼠行為學(xué)、AHR、氣道炎癥等指標(biāo)的改善作用