花鰻鱺種質(zhì)資源的研究.pdf

1、本文以海南產(chǎn)花鰻鱺為研究對(duì)象，采用染色體核型研究、同工酶電泳技術(shù)、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)以及細(xì)胞色素b基因序列分析技術(shù)，對(duì)花鰻鱺的種質(zhì)資源進(jìn)行了研究。 通過對(duì)花鰻鱺的核型分析，發(fā)現(xiàn)花鰻鱺的核型為 2n=38，16m+4sm+18t，染色體臂比 NF=58。相對(duì)長度從 2.89±0.12％到6.72±0.30％，分散度較大。還比較了花鰻鱺與日本鰻鱺和歐洲鰻鱺的核型，認(rèn)為花鰻鱺與日本鰻鱺的較為相似，親緣關(guān)系較近，且比歐

2、洲鰻鱺的進(jìn)化程度更高。 運(yùn)用聚丙烯酰胺垂直梯度凝膠電泳法對(duì)花鰻鱺7種組織(肌肉、肝臟、腎臟、心臟、脾臟、眼睛、尾鰭)的 3種同工酶(MDH、LDH、EST)進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明：花鰻鱺 3 種同工酶系統(tǒng)都具有組織特異性；花鰻鱺的EST酶具有一定的組織特異性，但是不明顯；LDH 酶帶多于典型的5條酶帶；MDH 具有線粒體型(m-MDH) 和上清液型(s-MDH)兩種類型。與日本鰻鱺和歐洲鰻鱺相比較，3種鰻鱺的同工酶圖譜明顯不同

3、，表現(xiàn)出很強(qiáng)的種屬差異。 用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)對(duì)海南產(chǎn)花鰻鱺群體的遺傳多樣性進(jìn)行了檢測(cè)。從100個(gè)隨機(jī)引物中篩選出20個(gè)引物對(duì)花鰻鱺的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，結(jié)果表明：20個(gè)引物共檢測(cè)到174條清晰且重復(fù)性好的條帶，每個(gè)引物可擴(kuò)增出6～13條帶，分子量在125～2200bp之間，其中多態(tài)位點(diǎn)為88個(gè)，占50.42％;群體的Shannon多樣性指數(shù)為0.3310，Nei基因多樣性指數(shù)為0.2261；個(gè)體間最大遺傳距離為0

4、.2903，最小遺傳距離為0.0159，可初步判斷海南產(chǎn)花鰻鱺群體的遺傳多樣性比較豐富。 在線粒體DNA水平，以日本鰻鱺線粒體基因組序列為模板，合成引物，進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠純化后，目的片段被克隆到 pMD18-T 載體上，序列測(cè)定的結(jié)果顯示得到海南產(chǎn)花鰻鱺細(xì)胞色素b(Cyt b)基因序列 1140bp。用DNA 分析軟件MEGA2比較了海南產(chǎn)花鰻鱺與遞交到GenBank中的8種分布在中國東南沿海，日本海域及南