日本血吸蟲感染及相關(guān)抗原對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠Ⅰ型糖尿病拮抗作用的初步研究.pdf

1、目的:建立實(shí)驗(yàn)性Ⅰ型糖尿病小鼠模型，探討日本血吸蟲感染和血吸蟲相關(guān)抗原對(duì)實(shí)驗(yàn)性Ⅰ型糖尿病小鼠的拮抗作用，為Ⅰ型糖尿病的預(yù)防與治療探索新的途徑。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)分兩部分，第一部分用32只雄性BALB／c小鼠(18-22g)，常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機(jī)分為4組，每組8只小鼠：A組為日本血吸蟲感染+糖尿病造模組，B組為單純糖尿病造模組，C組為陰性對(duì)照組，D組為正常對(duì)照組。A組實(shí)驗(yàn)小鼠感染日本血吸蟲尾蚴8周后，與B組雄性BALB／c小鼠共

2、計(jì)16只同時(shí)腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)，誘導(dǎo)Ⅰ型糖尿病模型，C組小鼠腹腔注射檸檬酸緩沖液，每周進(jìn)行檢測(cè)，動(dòng)態(tài)觀察血糖和尿糖變化。造模4周后剖殺各組小鼠，留取血清，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定血清γ-干擾素(IFN-γ)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)水平，取小鼠胰腺組織觀察其病理變化。第二部分采用與第一部分相同方法構(gòu)建Ⅰ型糖尿病小鼠模型，同時(shí)制備日本血吸蟲可溶性成蟲抗原（SWA）和可溶性蟲卵抗原（SEA）。造模成功后的24只小鼠隨

3、機(jī)分3組，每組8只小鼠。A組糖尿病模型鼠經(jīng)腹部皮下多點(diǎn)注射日本血吸蟲SWA進(jìn)行免疫；B組糖尿病模型鼠經(jīng)多點(diǎn)注射日本血吸蟲SEA進(jìn)行免疫；C組糖尿病模型鼠用PBS代替抗原腹部皮下免疫。免疫劑量均為50μg/只，每周免疫1次，共免疫4次。末次免疫后行小鼠尾靜脈采血，每周檢測(cè)1次血糖，持續(xù)觀察1個(gè)月后，剖殺各組小鼠，留取血清，采用ELISA雙抗夾心法測(cè)定各組小鼠血清中IL-4和IFN-γ的水平，并取胰腺觀察病理改變。
　　結(jié)果:

4、　　第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與陰性對(duì)照組C組、正常對(duì)照組D組相比，日本血吸蟲感染的STZ誘導(dǎo)糖尿病模型組A組和單純STZ誘導(dǎo)糖尿病模型組B組小鼠剛開始都出現(xiàn)了明顯的多飲、多食、多尿和體重減輕等典型的糖尿病表現(xiàn)。在4w左右，B組尿糖均為陽性，其中75％為++++，25%為+++，血糖水平為13.05±0.83 mmol/L；胰腺組織均有不同程度的胰島萎縮、數(shù)量減少、分布稀疏、胰島細(xì)胞數(shù)亦減少、胰島β細(xì)胞空泡變性，使胰島呈空虛狀態(tài)，并有不同程

5、度淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)及胰島炎改變。而A組在造模后4w左右，尿糖75%為+，25%為++，體重21.62±1.88g與B組體重16.32±0.38g相比有所增加，具有顯著差異。血糖檢測(cè)為9.40±1.01mmol/L，相對(duì) B組有所降低，具有顯著差異，并且胰腺病理檢查胰島結(jié)構(gòu)大多保持完整，淋巴細(xì)胞僅浸潤(rùn)了胰島周邊區(qū)或?qū)Ч軈^(qū)，未看見胰島內(nèi)部有大量的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。最后一次血糖測(cè)定后，檢測(cè)血清IFN-γ和IL-4，A組小鼠血清中IL-4水平63.21

6、±10.92pg/ml顯著高于B組4.42±0.48pg/ml，具有顯著性差異；而A組小鼠血清中IFN-γ水平287.33±34.85pg/ml低于 B組341.11±39.88pg/ml，具有顯著性差異。
　　第二部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：用日本血吸蟲 SEA免疫的糖尿病模型組B組小鼠血糖于3w開始略有降低，4w左右達(dá)到9.85±1.17 mmol/L，比C組單純糖尿病模型組12.14±1.25mmol/L有明顯降低，差異具有顯著性，但

7、日本血吸蟲 SWA免疫的糖尿病模型組A組小鼠血糖12.11±0.67mmol/L與C組無明顯差異。B組小鼠的胰島結(jié)構(gòu)雖沒有保持完整，但淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)較 C組少，胰島內(nèi)部也未見大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。A組小鼠與C組小鼠胰腺相比較未見明顯變化，胰島仍可見大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，殘余胰島細(xì)胞數(shù)量減少，并可見少數(shù)胰島結(jié)構(gòu)被破壞。B組小鼠在4w末血清中IL-4水平23.87±4.85pg/ml高于C組4.39±0.56pg/ml，具有顯著性差異；而IFN-γ水