凋亡基因Bax和Smac在胃癌組織中的表達和臨床意義.pdf

1、背景： 細胞凋亡又稱為程序性死亡(PCD)，是細胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，在多細胞生物清除異常細胞及生物體進化、系統(tǒng)發(fā)育、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中起著重要調(diào)節(jié)作用。生理狀況下，細胞凋亡與增殖保持動態(tài)平衡，以維持多細胞器官完整性和穩(wěn)定性。然而在異常增生的組織細胞和腫瘤的形成過程中，出現(xiàn)細胞內(nèi)促凋亡因子和抗凋亡因子平衡失調(diào)，導(dǎo)致細胞凋亡缺陷和調(diào)控異常，引起一系列病理生理變化。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多種因素長期共同作用的結(jié)果。在分子水平上，腫瘤的發(fā)生常

2、涉及多基因參與，是一個多階段、多步驟的復(fù)雜的生物學(xué)過程，通常被認為是由于細胞原癌基因的激活和抑癌基因的失活擾亂了正常細胞增殖和分化的調(diào)控，導(dǎo)致增殖過度、分化不足。但是，科學(xué)研究越來越多地發(fā)現(xiàn)，腫瘤的發(fā)生不僅與腫瘤細胞的生長速度有關(guān)，而且與其死亡速度也有關(guān)，細胞凋亡亦是腫瘤發(fā)生發(fā)展的一個重要因素。因此應(yīng)該說腫瘤不僅是增殖和分化異常的疾病，也是凋亡異常的疾病。細胞凋亡異常在腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用。許多凋亡相關(guān)基因參與了腫瘤

3、的發(fā)生發(fā)展，Bax和Smac是新發(fā)現(xiàn)的重要細胞凋亡誘導(dǎo)基因。1993年Oltval發(fā)現(xiàn)凋亡調(diào)節(jié)基因Bax具有加速細胞凋亡的功能。Smac(secondmitochondria-derivedactivatingofeaspases)是2000年Wang等率先報道的一種與細胞色素C同時從線粒體內(nèi)釋放到細胞質(zhì)中的膜間隙蛋白。能通過增強caspase-3活性來促進細胞凋亡。二者的凋亡異常與胃癌的形成和發(fā)展關(guān)系密切，并對胃癌的治療和預(yù)后具有重要

4、指導(dǎo)意義。 目的： 本研究的目的是通過檢測胃癌及癌旁組織中Bax和Smac的表達，研究二者的相互關(guān)系及對胃癌發(fā)生發(fā)展的作用，探討其表達異常與胃癌臨床病理的關(guān)系。進一步闡述胃癌發(fā)生發(fā)展的一些相關(guān)機制，為臨床治療胃癌提供新的依據(jù)和思路。 材料與方法： 1.標本來源：山東省腫瘤防治研究院病理科經(jīng)手術(shù)治療的胃癌病人石蠟塊標本(自2005年6月～2007年2月)50例。其中8例病人術(shù)前作2周期化療，方案為FOLFO

5、X。其中男性32例，女性18例，年齡28歲～79歲，中位年齡56.7歲。常規(guī)病理檢查并按分化程度分為高/中分化腺癌20例，低分化腺癌22例，粘液腺癌8例。胃底胃體癌19例，胃竇癌31例。累及肌層29例，累及全層至漿膜外組織21例。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例，非淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24例。 下切緣作為正常對照(n=30)。將石蠟標本4μm厚度連續(xù)切片，分別HE染色及免疫組織化學(xué)染色。 2.試劑：工作液Bax多克隆抗體購自福州邁新生物技術(shù)開

6、發(fā)有限公司。抗人Smac多克隆抗體(Anti-humanSMAC/DiabloAntibody)購自美國R&D公司。第二抗體和第三抗體及SP試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。 3.免疫組織化學(xué)染色：采用鏈霉卵白素-生物素-辣根過氧化物復(fù)合物法(SP)。Bax和Smac抗體工作液濃度1:50。以磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對照。 結(jié)果： Bax和Smac在正常組織中和在胃癌中的表達：30例正常組織中，Bax陽性表

7、達90％(27/30)，Smac陽性表達率93.3％(28/30)。50例胃癌組織中，Bax陽性表達率為52％(26/％50)，Smac陽性表達率56％(28/50)。與正常胃粘膜比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Bax和Smac表達與胃癌組織分化呈正相關(guān)。這說明了這兩種基因的凋亡異常與胃癌的發(fā)生和發(fā)展有密切聯(lián)系。檢測胃癌組織中這兩種基因的表達可間接反應(yīng)腫瘤的預(yù)后。 結(jié)論： 我們發(fā)現(xiàn)在正常胃粘膜上皮有較高的Bax和Smac表達，在非