抗除草劑轉基因甘薯的再生及鑒定.pdf

1、本研究以甘薯品種徐薯18的胚性懸浮細胞團為受體材料，對根癌農桿菌介導的甘薯遺傳轉化體系進行了優(yōu)化。同時利剛農桿菌介導法將bar基因導入品種栗子香和徐薯18中，獲得了對除草劑具有高度抗性的轉基因植株；并且用bar基因作為篩選標記基因，將SOS基因導入栗子香和徐薯18中。主要結果如下： 1.將質粒pBI121的gusA基因的酶切片段插入質粒pCAMBIA3300的多克隆位點，構建新的雙元載體pCAMBIA3300/GUS，并將其導入

2、農桿菌菌株EHA105中。以徐薯18的胚性懸浮細胞為材料，對轉化體系進行了優(yōu)化。利用GUS瞬時表達比較了甘露醇預處理及不同共培養(yǎng)方式對轉化效果的影響，結果表明，在共培養(yǎng)培養(yǎng)基中添加30mg/L，乙酰丁香酮時，非甘露醇預處理、液體靜置共培養(yǎng)的胚性細胞團的Gus瞬時表達率最高，液體靜置共培養(yǎng)適宜的共培養(yǎng)時間為2 d。 2.對栗子香和徐薯18胚性細胞團對PPT的敏感性進行了分析，結果表明選擇培養(yǎng)基中適宜的PPT濃度分別為0.5 mg/

3、L和0.3m/L。用根癌農桿菌菌株EHA105，分別轉化870個栗子香的胚性細胞團和480個徐薯18的胚性細胞團，通過選擇培養(yǎng)，分別獲得了165個和81個PPT抗性愈傷組織。其中的139個和62個抗性愈傷組織通過體細胞胚胎發(fā)生途徑，分別再生出1431株和276株擬轉基因植株。GUS檢測以及PCR、Southern blot和Northern blot分析表明，外源基因已經整合到甘薯品種的基因組中；栗子香再生植株中轉基因植株占擬轉基因植株

4、的86％，徐薯18的再生植株中75％為轉基因植株。除草劑噴灑實驗表明，轉基因植株對正常大田劑量甚至更高劑量的除草劑表現出很強的抗性，說明bar基因在轉基因植株中得到了有效的表達。未發(fā)現轉基因植株在形態(tài)學上的變異。將抗除草劑的bar基因導入到甘薯品種中，不僅可以獲得抗除草劑的轉基因甘薯，而且bar基因也可作為一種選擇標記基因，為用基因工程改良甘薯提供一種有效手段。 3．以bar基因為選擇標記基因，用攜帶雙元載體pCAMBIA330