抗除草劑基因載體的構(gòu)建及其水稻轉(zhuǎn)化.pdf

1、水稻(Oryza sativa L．)是我國乃至世界上的主要糧食作物。在我國，其栽培總面積、總產(chǎn)量和單位面積產(chǎn)量均居各類糧食作物的首位。每年，全國由于雜草危害直接造成的水稻產(chǎn)量損失達(dá)一千萬噸以上。然而，防除稻田雜草需要投入大量人力、物力和財(cái)力，還噴灑大量除草劑，對環(huán)境造成嚴(yán)重污染。 轉(zhuǎn)基因技術(shù)的產(chǎn)生和發(fā)展，使我們創(chuàng)造突破性的種質(zhì)資源成為可能。利用植物基因工程培育抗除草劑優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)水稻品種，將經(jīng)濟(jì)有效的控制稻田雜草，從而推動(dòng)我國糧食

2、生產(chǎn)。 aroA基因所編碼的5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)提供對除草劑草甘膦的抗性；并且aroA基因所對應(yīng)的除草劑為高效、低毒、在生物體和土壤中無殘留、環(huán)保型的除草劑。 本研究，將抗除草劑草甘膦的基因aroA構(gòu)建在植物表達(dá)載體上，并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入水稻不同品種中，獲得了抗除草劑的轉(zhuǎn)基因植株，同時(shí)對水稻轉(zhuǎn)基因過程中的一些問題作了初步探討。 其主要研究結(jié)果如下： 1．利用載體pCambi

3、a1301和除草劑草甘膦抗性基因基因aroA，構(gòu)建了一個(gè)去除了潮霉素抗性基因hpt的植物表達(dá)載體pCambia1301-aroA。 2．利用構(gòu)建的載體，通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將aroA基因轉(zhuǎn)入水稻品種，最終共得到16株再生植株。其中其中中花15得到4株，蜀恢527得到12株。 3．對16株水稻再生植株進(jìn)行PCR檢測，有9株顯示為陽性。其中，蜀恢527有8株，中花15有1株。將PCR檢測為陽性的植株，進(jìn)行田間除草劑抗性檢測，

4、結(jié)果有2株表現(xiàn)出了除草劑抗性。這一結(jié)果說明目的基因不僅整合到水稻基因組中，而且得以充分表達(dá)，使水稻植株產(chǎn)生了除草劑抗性。 4．對4個(gè)材料的成熟胚和幼胚進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：不同基因型的水稻出愈率有所不同，其中粳稻出愈率比秈稻高；同一基因的不同材料之間的出愈率也不相同。幼胚誘導(dǎo)出的愈傷質(zhì)量較好，生長迅速，但是操作較麻煩，而且幼胚的污染率高于成熟胚。 5．將不同受體材料的愈傷組織分別接種到含不同濃度草甘膦的培養(yǎng)基