水稻抗苯達(dá)松和磺酰脲類除草劑基因的分離與克隆.pdf

1、利用Y-射線誘變技術(shù)，中國科學(xué)家張集文研究員和日本學(xué)者M(jìn)oriK先后分別從光/溫敏秈稻不育系w6154S和粳稻常規(guī)種農(nóng)林8號的突變后代中獲得了苯達(dá)松敏感致死材料8077S和農(nóng)林8號M。利用該致死突變位點(diǎn)標(biāo)記光/溫敏秈稻不育系或一般質(zhì)不育系，在苗期通過噴施一定濃度的苯達(dá)松溶液，可以去除不育系自交種子，保證雜交制種純度。過去的研究表明，兩個(gè)敏感突變體均受一對隱性基因基因控制，分別被命名為bel和bs!，利用SSR標(biāo)記同時(shí)被定位在第三染色體上

2、，分別距離SSR標(biāo)記RMl68為7.1cM和SSR標(biāo)記RM3856為14.1cM。本研究在前期的研究基礎(chǔ)上，對敏感致死位點(diǎn)進(jìn)行了精細(xì)定位，通過基岡互補(bǔ)和反義抑制，最終分離克隆了該基因。同時(shí)，利用RT—PCR技術(shù)，分析了該基因的表達(dá)特性。獲得的主要研究結(jié)果如下： 1.敏感性實(shí)驗(yàn)表明，8077S和農(nóng)林8號M對lOOmg/L的苯達(dá)松就具有一定敏感性，兩者的敏感性均比相應(yīng)野生型的敏感性要低60倍左右；同時(shí)，農(nóng)林8號M又比8077S要更敏

3、感； 2.等位性實(shí)驗(yàn)表明，來自兩個(gè)不同突變體的突變位點(diǎn)互相等位； 3.利用SSR標(biāo)記將致死位點(diǎn)精細(xì)定位在SSR標(biāo)記3a和7a之間，其遺傳距離分別為0.1cM和0.4cM，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，致死位點(diǎn)與PCR—RFLP標(biāo)記DP1和DP2共分離； 4.生物信息學(xué)分析表明，該致死位點(diǎn)可能與細(xì)胞色素P450基因有關(guān)，并確定了四個(gè)P450基因?yàn)楹蜻x基因。進(jìn)一步對四個(gè)候選基因進(jìn)行測序比較分析表明，其中一個(gè)P450基因，即CYPS