抗除草劑和多價(jià)抗蟲基因?qū)胨竟鉁孛艉瞬挥档难芯?pdf

1、雜草和害蟲的危害是導(dǎo)致水稻減產(chǎn)的重要原因，每年由此給全球水稻生產(chǎn)造成的損失高達(dá)數(shù)百億美元。為了提高雜交水稻的抗蟲性、方便直播制種和除草，避免人們對(duì)抗生素篩選標(biāo)記的安全性顧慮，我們開展了抗除草劑、抗蟲植物表達(dá)載體的構(gòu)建和水稻光溫敏核不育系的轉(zhuǎn)化研究。抗除草劑、抗蟲光溫敏核不育系水稻培育成功，將有望在抗除草劑和抗蟲雜交水稻培育、雜交水稻直播栽培和草害防治、雜交稻機(jī)械化制種中發(fā)揮重要作用。 本文構(gòu)建了包含抗除草劑基因Epsps和3個(gè)抗

2、蟲基因(馬鈴薯蛋白酶抑制劑基因Pin-Ⅱ、蘇云金桿菌毒蛋白基因Bt cryl(A)及雪花蓮?fù)庠茨鼗?GNA)的植物表達(dá)載體。其中，除草劑基因Epsps不僅在實(shí)驗(yàn)中作為篩選標(biāo)記基因方便進(jìn)行篩選，而且可以使作物獲得除草劑抗性而方便除草、直播和機(jī)械化制種。 基因槍法和農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法將連鎖在一起的4個(gè)基因轉(zhuǎn)化水稻光溫敏核不育系7001S。通過基因槍轉(zhuǎn)化法轟擊1160塊的愈傷組織得到167株再生植株，轉(zhuǎn)化率17.4％。通過農(nóng)桿菌介

3、導(dǎo)轉(zhuǎn)化法侵染270塊的愈傷組織，獲得6株再生植株，轉(zhuǎn)化率2.2％。轉(zhuǎn)基因再生植株的分子生物學(xué)鑒定表明，抗除草劑基因Epsps和抗蟲基因已經(jīng)整合到水稻基因組中，其拷貝數(shù)為1-2個(gè)。除出只有1～3個(gè)基因檢出的植株，選出81個(gè)含有4個(gè)基因的轉(zhuǎn)基因植株。部份植株中只含其中1～3個(gè)基因，可能是由于基因槍轉(zhuǎn)化中部分片段發(fā)生丟失造成的。利用除草劑草甘膦處理含4個(gè)基因的轉(zhuǎn)基因植株，它們表現(xiàn)出對(duì)草甘膦具有不同的抗性，推測(cè)是由于抗除草劑基因在不同個(gè)體中表達(dá)