棉花Bt抗蟲基因與bar抗除草劑基因的雙價(jià)植物表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、棉花是重要的經(jīng)濟(jì)作物,但是由于棉花的生長長期受到蟲害和雜草的侵害,就這兩項(xiàng)所造成的直接經(jīng)濟(jì)損失就占作物總產(chǎn)值的10％~20%左右,因此棉花基因工程的發(fā)展就大大促進(jìn)了抗蟲、抗除草劑以及抗逆等棉花品種的培育。
　　本研究利用PCR擴(kuò)增出來的抗除草劑bar基因和實(shí)驗(yàn)室保存的抗蟲Bt基因,成功構(gòu)建抗除草劑與抗蟲雙價(jià)植物表達(dá)載體 pBI121-bar/Bt。將植物表達(dá)載體 pBI121-bar/Bt和pBI121-Bt分別轉(zhuǎn)化至農(nóng)桿菌工程菌

2、菌株LBA4404中,并用轉(zhuǎn)化后的農(nóng)桿菌菌液,分別侵染棉花新海14、新海16、新海24和新海30的胚性愈傷組織。對(duì)pBI121-bar/Bt轉(zhuǎn)化后的抗性愈傷組織進(jìn)行了PPT濃度篩選,其濃度在3.0 mg/L時(shí),胚性愈傷的生長良好,同時(shí)篩選效果也明顯;四種不同基因型胚性愈傷的生長情況中新海24的生長狀態(tài)最差,說明不同基因型對(duì)PPT的敏感性有差異。對(duì)轉(zhuǎn)化后的頭孢霉素濃度也進(jìn)行了篩選,結(jié)果表明:轉(zhuǎn)化pBI121-bar/Bt基因的胚性愈傷在頭

3、孢霉素濃度為800 mg/L時(shí),既能很好地防止了農(nóng)桿菌造成的污染,又能不抑制胚性愈傷的生長;轉(zhuǎn)化pBI121-Bt基因的胚性愈傷的有效頭孢霉素濃度為600 mg/L。說明轉(zhuǎn)化不同基因后,胚性愈傷對(duì)抗生素的敏感度有所不同。
　　轉(zhuǎn)化pBI121-bar/Bt基因的不同棉花品種的胚性愈傷在PPT濃度為3 mg/L,頭孢霉素濃度在800 mg/L時(shí),新海14的胚性愈傷較其他品種出愈率最高,侵染后變黑程度較輕;新海24的出愈率最低,侵染后