水稻除草劑抗性ALS基因的克隆、表達載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因.pdf

1、在我國水稻是三大糧食作物之一，在國民生產(chǎn)中的地位舉足輕重。而在近十幾年來，水稻田中的雜草稻已成為了水稻生產(chǎn)過程中的一種新型草害。由于雜草稻的危害，造成水稻產(chǎn)量的損失每年高達上百萬噸。因此，發(fā)掘水稻抗性基因、培育抗除草劑水稻新品種成為了解決問題的最有效途徑。
　　本研究以水稻“選1”作為ALS基因克隆的材料，并且“選1”對咪唑乙煙酸——乙酰乳酸合酶(ALS)抑制劑類除草劑具有耐受性。由于ALS基因的一些特性:GC含量高、GC含量分布

2、極不均勻等特點，使得ALS基因難以克隆。研究主要通過對設(shè)計的不同引物、最適用的反應酶、PCR反應體系及條件進行了大量的摸索，不斷優(yōu)化條件，最終確定了完整的ALS基因的最為有效的克隆方法。
　　對獲得的完整的ALS基因，構(gòu)建了表達載體pCAMBIA1301-ALS，分別轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105和Gv3101，以用來分別侵染浮萍的愈傷組織和野生型擬南芥。并且對農(nóng)桿菌EHA105介導的浮萍愈傷組織的侵染體系也進行了部分條件的摸索，主要從暗

3、培養(yǎng)時間、暗培養(yǎng)培養(yǎng)基等方面進行摸索。
　　本研究也對利用PCR介導的ALS基因的點突變進行了摸索，根據(jù)文獻報道設(shè)計了點突變位點1643位，旨在將TGG突變?yōu)門TG（Trp色氨酸變?yōu)長eu亮氨酸）。
　　與此同時，我們還以浮萍作為受試植物，建立的除草劑篩選系統(tǒng)。通過比較浮萍的形態(tài)結(jié)構(gòu)、葉狀體數(shù)、鮮重、葉綠素含量，篩選或定量地分析具有抑制植物生長作用或是以ALS為靶標的多種除草劑。本實驗對15種除草劑進行了初篩以及有效作用濃度