水稻osvdac基因RNAi載體的構(gòu)建及其在轉(zhuǎn)基因植株中的表達(dá)分析.pdf

1、電壓依賴性陰離子通道(voltage-dependentanionchannel,VDAC)廣泛存在于真菌、植物和動(dòng)物中。VDAC主要在調(diào)節(jié)線粒體與細(xì)胞質(zhì)之間物質(zhì)運(yùn)輸和能量調(diào)節(jié)以及在線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中具有重要作用。
　　在水稻基因組中,已發(fā)現(xiàn)至少有8個(gè)編碼VDAC的基因。本研究采用酶切酶連方法針對(duì)其中5個(gè)水稻osvdac基因(osvdac4、osvdac5、osvdac6、osvdac7和osvdac8)構(gòu)建RNA干涉表達(dá)載體

2、,其中osvdac4和osvdac7干涉表達(dá)載體成功轉(zhuǎn)化水稻品種日本晴,獲得了轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株。以osvdac7基因下調(diào)的轉(zhuǎn)化植株為材料,利用熒光定量PCR分析技術(shù),研究了osvdac7基因下調(diào)條件下,其它osvdac家族成員的表達(dá)水平變化。主要結(jié)果如下:
　　1.以pMCG161構(gòu)建了5個(gè)水稻osvdac基因的9個(gè)RNA干涉表達(dá)載體,即osvdac4-5、osvdac4-3、osvdac5-5、osvdac5-3、osvdac6-

3、3、osvdac7-5、osvdac7-3、osvdac8-5和osvdac8-3。
　　2.用9個(gè)RNA干涉表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)化水稻品種日本晴,只有osvdac4-3、osvdac7-5和osvdac7-3的遺傳轉(zhuǎn)化成功獲得了陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株。熒光定量PCR分析表明,其被干涉的相應(yīng)基因均有不同程度的下調(diào)表達(dá)趨勢(shì)。
　　3.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR,分析了osvdac7基因下調(diào)的RNA干涉植株中8個(gè)osvdac基因表達(dá)水平的變化。結(jié)