抗TYLCV RNAi載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)基因番茄的抗病性研究.pdf

1、河北科技大學(xué)碩士學(xué)位論文抗TYLCV RNAi載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)基因番茄的抗病性研究姓名：劉紅霄申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：仇燕201205河北科技大學(xué)碩士學(xué)位論文A b s t r a c tT 0 m a t 0i s 缸坤。比m t 伽l 訊r a t e db r e e do f 魚l i t sa n d V e g e t a b l e s ．T o m a t o y e l l o wl e a fc 叫詘

2、n l s ( T Y L C v ) ，訛c h b e l o n g s t 0 也e g 朗：1 1 s ．B 昭D ，，l D v f _ m ，i I ln l e 伽n i l y G 已朋覷州，．北缸e ，i s 廿a n S I n i t t e db y w 1 ：1 i t e n yB 9 7 ，l 函缸幻6 口c fa n dc a u s es 耐o u s1 0 s s e st 0t o m a t o

3、p r o d u 嘶o n ．1 1 l eb e s tw a y t 0 c o I l t r o l 1 Y L C I vi s t 0 c u l t i V a t e V r i u s - r e s i s t a n tc u l t i V a t e db r e e d ．R N Ai n t e r f 醯e 1 1 c e ( R ：N A i ) ，0 n e o ft h eu s e m lt e

4、 c b n 0 1 0 百船t 0b r e c d 咖s - r 鼯i S t a n tt o m a t 0 i sC 0 n C e m e d b y i t sh i 罟he 伍c i 吼c y ' s p e C i 丘c i 饑h e r c d 塒a n d b i 0 1 0 百c a ls a 融y ．‘j 恤也i s 、v 0 如住鵬er e 西o I l s 肋m 0 p ％r e a d i I l

5、 g 丘鋤e s ( O R F s ) o f n l e 啊r a lg e n o m e C 1 ，C 2 ，a n d m eo v e d 叩r e 西o nC 1 C 2w e r el l s e df o rs t u ( b ，i n g 血e i re m c i e n c y t 0 t a r g e t 啊r a lD N A a c c 唧u l a t i o n i n p l a n t c e l

6、 l s ．E a c h o f 也e 廿l r e e r e 百o n s h a db e 吼c l o n e da n dc o m e c t e dm o p F G C 5 9 4 1i ns e n s e ／觚t i s e s e d h 出。衄t 0c 0 1 1 s 劬耽也r e eR N 赴v c c t o r sp F G C 5 9 4 1 一F C l —R C l ，p F G C 5 9 4 1

7、 一F C 2 一R C 2a n d p F G C 5 9 4 1 - F C l C 2 - R C l C 2 ．：T h e p F G C 5 9 4 1 - F C l - R C l ，p F G C 5 9 4 1 - F C 2 一R c 2 鈾m p F G C 5 9 4 1 - F C l C 2 一R C l C 2V e c t o r Sw e r e 臼r a I l S f 醯e di n 協(xié)伽6 口

8、c 地一“聊m ，，l 《歸c f g ，留G V 3 10 l ，w K c h w e r ei I 】燈o d u c e di n _ t ot o m a t o p l a n tt i s s u 懿1 ，缸A 孕．o - i l l 矗1 仃a t i o nt e c h n i q u e ．T o m a t o p l a n t sa tt w o —m r e e l e a V 偽s t a g ew c

9、r ei I l 丘1 仃a t e dw i t hA g r o b a c t e r i u m h a r b o d n g m e 壬< N ～c o n 曲r u c t s ．刖1p 1 鋤t sw e r ec h a l l e I l g e d 麗也詘哪l l s i l l gn l eT Y L C V i n f ．e c t i o l l s c l o n e2 0d a y s p o s

10、ti n f i №i o n ．T oi d e n t i 母m er e s i s t a n c e ，1 Y L C Vs ) ，玎叩t 0 I 璐o f 觚a t 0p l a n t Sw e r ei I l V e s t g a t e d a n dv i 】m sD N A w 鵲d e t e c t e db y P C R r e a c t i o n ．T h er e S u hs h o w c

11、dm a ta l l t l l e Ⅱ1 r e e 丘a 鯽e n t sc a ni n l 曲i to r r o d u c e a c c 毗“撕o no f 咖1 g e n o m e d u et 0 廿1 ei I l d u c n o no f s i R N A m e c h a n i s m ．n l e i l m l t e r e dp l a r I t s 謝也n l eC 0 n s 仃1

12、l c tc o n t a i 】血培Ⅱl ea sC 2 r e 百o np r o V e d t 0b e m e b e S tr e 昏o n ?！眎 I l d u c i n gm e r e s i s t a n c e t oT Y L C V w i t h8 7 ．5 ％砒曲t i o n r a t e ．T h e r e s u l t so f m e s 砌y s h o w e d m a t t

13、h e i n d I 州o nr a t eo f c a l h l s 鋤da d v e I l t i t i o l l sb u do fc o t y l e d o nw e r e1 1 i 曲e rm 孤m a to f h y p o c o t y l ．T h eb e s tm e d i u mf o rc a l l u Sa I l db u dd i f r e r e r 破a t i o no

14、f c o t y l e d o nw 硒M S + O ．2 m ∥LI A A 十1 ．Om ∥L 6 一B A ，f o rl 卵o c o t y lw a sM S + 0 ．5m g ／L №～+ 1 ．Om g ，L6 - B A ，a r l dt 1 1 e r o o t 砌u C t i o n r a t ew 勰m e l l i 曲e s to nM Sm e d i 吼哪p 1 鋤饑t e d 奶m O

15、．1 m g ／L 姒．1 1 1 eo p t i r n j s e de X p 幽e n t a lc o n d i t i o I l so ft o m a t o 廿a n s f o n l l a t i o nb y 咿0 b a c t e d u m - m e d i a t e d 恤n s d u c t i o n w e r ea 目- o b a C t e r i u | ：1 1l i q u

16、i dc o n c e l l 昀t i o nO D 6 0 0 = 0 ．2 ，i n f e 咖g 石m e2 0I 血( c o t y l e d o n ，b 齜g r a t er e a C h e d3 3 ．3 ％)0 r 3 0m i n O 卵o c o t y l ，b u d d i n g r a t er e a c h e d 2 3 ．3 ％) a 1 1 dc o C u l t 嘶n gf o