RNA干涉轉基因馬鈴薯抗卷葉病毒(PLRV)抗病性研究.pdf

1、馬鈴薯卷葉病毒屬黃化病毒組,由蚜蟲以持久方式傳播,是馬鈴薯上最重要的病毒病害之一。馬鈴薯卷葉病毒可侵染馬鈴薯引起卷葉、黃化、矮縮、僵化及塊莖網(wǎng)狀壞死等癥狀,嚴重影響馬鈴薯的產量和品質,是一種世界范圍的馬鈴薯的重要病害。
　　RNAi是由dsRNA介導的基因沉默現(xiàn)象,是細胞內的一種防御機制,可特異地降解細胞內與之具有同源性的核酸,達到調節(jié)細胞內編碼基因的表達的作用。由于RNAi具有抗病毒表現(xiàn)型為高抗或近似于免疫,抗病性更持久,生物安

2、全性高等優(yōu)點,具有更加廣闊的應用前景。因此,探討利用RNA介導抗性來培育抗病毒轉基因馬鈴薯的這一新策略的可行性和應用價值具有重要的現(xiàn)實意義。
　　本研究利用大田統(tǒng)計方法結合分子生物學手段和生物信息學手段對本室轉化的23個轉RNA干涉載體馬鈴薯突變株進行抗病性鑒定。具體研究成果如下:
　　1.通過大田試驗發(fā)現(xiàn)了一些具有明顯特征突變的轉化體,如株高、葉片形態(tài)、產量等方面,說明轉入的外源載體引起了原來馬鈴薯基因組的改變。
　

3、　2.利用酶聯(lián)免疫法檢測技術研究受侵染后馬鈴薯卷葉病毒基因在這些轉化體中的表達情況,其中4p1-3、4p2-3、4p2-7、4號、5p1-6、5p2-6、5號為陽性,初步說明除這幾個株系以外的株系均有一定的馬鈴薯卷葉病毒抗性,所轉入的RNA干涉載體起到了一定的干涉PLRV作用。
　　3.通過熒光定量PCR分子生物學實驗研究,可以發(fā)現(xiàn)轉RNA干涉載體均有不同水平的馬鈴薯卷葉病抗性,但是抗性水平差異很大。其中4P1-3、4P2-3、4