蓖麻磷脂酶C基因的克隆及其RNAi表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、蓖麻是內(nèi)蒙地區(qū)非常具有區(qū)域特色的世界十大油料作物之一。蓖麻油由脂肪酸組成，主要成分是蓖麻油酸。磷脂酶C在控制蓖麻油酸生物合成過程中起關(guān)鍵性的作用，它催化2-油酰基卵磷脂形成1-?；?2-油?；视?，使非羥基脂肪酸進(jìn)入三酰基甘油。通過基因工程手段設(shè)計并構(gòu)建含有磷脂酶C基因的RNAi表達(dá)載體，以期在植物體內(nèi)轉(zhuǎn)錄出含有部分磷脂酶C基因發(fā)夾結(jié)構(gòu)的dsRNA，發(fā)揮干擾磷脂酶C基因表達(dá)的作用，從而提高總蓖麻油含量。
　　本試驗以通蓖5號蓖麻為

2、研究對象，提取其發(fā)育階段的種子總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，通過降落PCR得到長度分別為803bp和458bp的磷脂酶C基因片段C1和C2，采用Sanger雙脫氧鏈終止法對C1和C2進(jìn)行測序，測序結(jié)果與Genbank中蓖麻磷脂酶C基因的mRNA進(jìn)行同源性分析，同源性分別達(dá)到99.88％和99.13％，成功克隆了蓖麻磷脂酶C基因。并采用一步法成功構(gòu)建了蓖麻磷脂酶C基因的RNAi表達(dá)載體，為通過RNAi干擾技術(shù)獲得總蓖麻油含量高的蓖麻新材料奠

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