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1、蓖麻是世界十大油料作物之一,具有較高的經(jīng)濟價值與市場地位,被廣泛應(yīng)用于化工、航空、航天、機械等多個領(lǐng)域。蓖麻籽中存在著毒性物質(zhì),限制了蓖麻的綜合開發(fā)利用。蓖麻含有的毒性物質(zhì)中,以蓖麻毒蛋白毒性最強,它由A、B兩條鏈組成,其中A鏈為效應(yīng)鏈。利用分子生物學技術(shù),抑制蓖麻蛋白A鏈基因的表達,為培育蓖麻無毒轉(zhuǎn)基因植株奠定基礎(chǔ),對蓖麻無毒品種培育、提高蓖麻飼用價值及拓寬蓖麻綜合利用途徑有重要意義。 1.根據(jù)基因Genebank中發(fā)布的RT
2、A基因序列,分別設(shè)計4對特異性引物,在兩端分別插入不同的酶切位點。降落PCR法擴增蓖麻毒蛋白A鏈基因,純化RTA-S1,RTA-S2,RTA-AS1、RTA-AS2片段,連接克隆質(zhì)粒pGEM T-easy,轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109,經(jīng)菌落PCR及質(zhì)粒酶切鑒定正確的陽性克隆做序列測定。測序結(jié)果顯示,得到的基因片段與源序列高度同源,同源性分別為94%、94%、98%、98%。 2.將序列分析正確的陽性克隆提取質(zhì)粒,分別酶切回收RTA-
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