重組腺病毒介導表達蓖麻毒蛋白B鏈及其與A鏈聯(lián)合作用對細胞殺傷的研究.pdf

1、蓖麻毒素(RicinToxinRT)存在于大戟科植物蓖麻籽中，主要是蓖麻堿、蓖麻毒蛋白(Ricin)及過敏性物質(zhì)，Ricin是強細胞毒蛋白，對腫瘤細胞半數(shù)殺傷的濃度--IC60在10-12molL左右。Ridcin分子由A，B二條肽鏈構(gòu)成，通過一對二硫鍵相連。A鏈(RicinToxinAChain，RTA)是活性鏈具有毒性，能使核糖體失活，抑制蛋白質(zhì)的合成，使細胞死亡。但是單一的RTA無法進入細胞，無毒或毒性有限；B鏈(RicinTox

2、inBChaimRTB)對細胞沒有毒性，其功能是幫助RTA進入細胞。脅cin應(yīng)用于臨床腫瘤治療的研究和應(yīng)用由來已久。 為了避免Ricin的高毒性，發(fā)揮它在腫瘤治療中的作用，設(shè)想將RTA和RTB分開，將蓖麻毒蛋白B鏈基因插入El基因缺失腺病毒中，利用病毒作為載體在腫瘤灶局部表達RTB蛋白，然后再注射入RTA，由于RTA與RTB具有很強的親和性(0lsnesetaL.2001)，RTA將向腫瘤灶局部富集，并在RTB的幫助下進入細胞，

3、發(fā)揮RTA的細胞毒作用，殺傷細胞。同時，殺傷的細胞會釋放RTA／RTB復合體，產(chǎn)生一定的旁觀者效應(yīng)，殺傷周圍細胞。 為了驗證這一設(shè)想的可行性，本研究用原核表達系統(tǒng)融合表達帶有His和Trx標簽的RTA，分離制備了有生物活性的可溶性RTA蛋白，并且構(gòu)建了表達RTB的重組腺病毒載體，能在目的細胞中表達RTB蛋白。用表達RTB的重組病毒感染HEK293、№la、Smmc7721、HL7702等細胞，然后加入純化的RTA蛋白，發(fā)現(xiàn)細胞生