Bax基因重組腺病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及其對包裝細(xì)胞HEK293的毒性作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、我們以復(fù)制缺陷性腺病毒為基因轉(zhuǎn)移載體,以人類巨細(xì)胞病毒早期啟動子為真核基因表達(dá)啟動子,以Baxα基因為治療基因,構(gòu)建Baxα-pShuttle-Adeno重組腺病毒表達(dá)載體,并且證明其具有較高的目的基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)活性,同時發(fā)現(xiàn)由于重組病毒載體Baxα的表達(dá)先于病毒本身復(fù)制和包裝的發(fā)生,以及Bax蛋白對于包裝細(xì)胞HEK293的毒性作用,導(dǎo)致包裝細(xì)胞的死亡,而病毒本身尚未完成復(fù)制和包裝,致使病毒擴(kuò)增受阻,不能達(dá)到基因治療所需的病毒濃度.這提

2、示我們在將來的實驗中可以通過以可控的啟動子代替CMV啟動子,使含Bax α基因的重組腺病毒在包裝細(xì)胞HEK293細(xì)胞中不表達(dá)或低表達(dá),避免Bax 蛋白對于HEK293細(xì)胞的致死性毒性,使重組體得以包裝和擴(kuò)增,從而得到足夠的病毒量進(jìn)行膠質(zhì)瘤的基因治療.結(jié)論本實驗中構(gòu)建的Bax α-pShuttle-Adeno重組腺病毒表達(dá)載體和LacZ-pShuttle-Adeno重組腺病毒表達(dá)載體均能有效表達(dá)具有生物學(xué)活性的基因編碼蛋白.且其目的基因表

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