Salusin-α基因真核表達載體的構(gòu)建及在HEK293細胞中的表達.pdf

1、目的：研究增強型綠色熒光蛋白真核表達載體Salusin-a（pEGFP-Salusin-a）的構(gòu)建及在人胚胎腎細胞系293細胞（HEK293）中的表達。并探討冠心病患者血漿Salusin-a水平與冠狀動脈粥樣硬化之間的關(guān)系。
　　 方法：連續(xù)收集冠狀動脈造影證實的冠心病患者92例為研究對象，按臨床表現(xiàn)分為穩(wěn)定型心絞痛(SA)組和急性冠脈綜合癥(ACS)組；分別測定人血漿Salusin-a水平并進行Genisini評分，分析Sal

2、usin-a與冠狀動脈粥樣硬化之間的關(guān)系。提取人單核細胞系THP-1細胞Salusin-a的mRNA，逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）擴增Salusin-a基因，克隆入pEGFP-N3載體，雙酶切、菌落PCR及測序鑒定pEGFP-Salusin-a質(zhì)粒。用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染pEGFP-Salusin-a入HEK293細胞，分為轉(zhuǎn)染細胞組，質(zhì)粒對照組和空白對照組檢測，分析各組熒光蛋白和Salusin-a基因的表達。
　　 結(jié)果：冠心病患

3、者中血漿Salusin-a的水平明顯比健康對照組低，且Salusin-a與代表冠狀動脈病變程度的Gensini評分呈負相關(guān)。成功構(gòu)建pEGFP-Salusin-a質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)染HEK293，細胞轉(zhuǎn)染效率86％，轉(zhuǎn)染細胞組和質(zhì)粒對照組綠色熒光蛋白的表達明顯高于空白對照組，（p<0.05）；轉(zhuǎn)染細胞組和質(zhì)粒對照組Salusin-a mRNA的表達高于空白對照組，（p<0.05）。
　　 結(jié)論：冠心病患者血漿Salusin-a水平顯著降