甜葉菊EMS誘變及耐鹽突變體的篩選與鑒定.pdf

1、甜葉菊（Stevia rebaudiana Bertoni）作為一種理想的甜味劑和功能性保健產(chǎn)品，已為食品和醫(yī)藥領(lǐng)域研究和開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)。甜葉菊是一種鹽敏感植物，在土地鹽堿化日益嚴(yán)重的今天，選育耐鹽性強(qiáng)、適應(yīng)性廣的甜葉菊新品種顯得十分迫切和尤為重要。采用化學(xué)誘變與組織培養(yǎng)相結(jié)合的離體化學(xué)誘變是獲得甜葉菊耐鹽突變體的一種行之有效的方法。本試驗(yàn)以‘皖甜1號(hào)’-B1甜葉菊無(wú)菌組培苗莖段為試驗(yàn)材料，以甲基磺酸乙酯(EMS)為誘變劑，以NaCl作為選

2、擇壓力，對(duì)甜葉菊組培苗耐鹽閾值（臨界NaCl濃度）以及EMS誘變甜葉菊組培苗的適宜濃度和時(shí)間進(jìn)行了研究，以篩選出的1.0％NaCl為選擇壓力，篩選出了甜葉菊耐鹽變異株，通過(guò)生理生化和SRAP標(biāo)記對(duì)耐鹽變異體進(jìn)行了耐鹽性鑒定，并對(duì)鹽突變體進(jìn)行了盆栽耐鹽性驗(yàn)證。主要研究結(jié)果如下:
　　1、隨著NaCl濃度（0、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1.0％和1.2％）的升高，甜葉菊組培苗長(zhǎng)勢(shì)逐漸變?nèi)酢⑸L(zhǎng)受抑制、植株矮小、存活率和生

3、根率顯著降低;當(dāng)NaCl濃度達(dá)到1.0％時(shí)，甜葉菊組培苗基本停止生長(zhǎng)，葉片變小、發(fā)黃，存活率為3.13％，生根率為0;當(dāng)NaCl濃度為1.2％時(shí)組培苗全部死亡。根據(jù)篩選真正的耐鹽變異體的原則，初步確定‘皖甜1號(hào)’-B1甜葉菊組培苗耐鹽臨界NaCl濃度為1.0％。
　　2、將甜葉菊組培苗置于濃度分別為0、0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1.0％和1.2％的EMS中，分別震蕩浸泡0h、2h、4h、6h、8h、10h和12h后，

4、接種于MS培養(yǎng)基中，發(fā)現(xiàn)低濃度EMS及短時(shí)間處理，對(duì)甜葉菊組培苗株高、生根率和存活率影響較小;隨著EMS濃度的增大和處理時(shí)間的延長(zhǎng)，甜葉菊組培苗長(zhǎng)勢(shì)逐漸變?nèi)?，株高逐漸變小，項(xiàng)芽和腋芽生長(zhǎng)速度較慢，生根率和存活率急劇下降;當(dāng)EMS濃度大于1.0％，處理時(shí)間長(zhǎng)于8h或濃度大于0.8％，處理時(shí)間長(zhǎng)于10 h，甜葉菊組培苗的存活率均在50％以下，故確定EMS誘變‘皖甜1號(hào)’-B1甜葉菊組培苗帶腋芽莖段的適宜濃度和時(shí)間范圍為0.8-1.0％EMS

5、處理8-10h。
　　3、甜葉菊組培苗莖段經(jīng)1.0％ EMS處理8h后，接種于含1.0％ NaCl的MS培養(yǎng)基中，進(jìn)行誘變株的耐鹽性篩選，45 d后的存活率為13.67％，顯著高于對(duì)照的3.33％，共獲得41株耐鹽變異株。
　　4、耐鹽變異株接種存活后的第5d、10d、15d、20 d和25 d分別取樣，測(cè)定了處理和對(duì)照的葉綠素、脯氨酸、MDA、可溶性糖和可溶性蛋白含量，相對(duì)電導(dǎo)率以及POD、SOD和CAT等細(xì)胞膜保護(hù)酶系的

6、活性。結(jié)果表明，變異株的葉綠素、脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量均顯著高于對(duì)照，相對(duì)電導(dǎo)率和MDA含量顯著低于對(duì)照，CAT、POD和SOD活性在鹽脅迫的大多時(shí)間內(nèi)顯著高于對(duì)照。這表明，甜葉菊組培苗經(jīng)EMS誘變產(chǎn)生的突變體經(jīng)篩選后可獲得耐鹽性強(qiáng)的變異植株。
　　5、將經(jīng)過(guò)1.0％NaCl反復(fù)篩選出的41株甜葉菊組培苗擴(kuò)繁后提取其葉片DNA，并進(jìn)行SRAP分子標(biāo)記鑒定。結(jié)果表明，在生理生化水平上表現(xiàn)出耐鹽性的41株甜葉菊組培苗耐鹽變異