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文檔簡介
1、泡桐是我國重要的速生豐產(chǎn)和庭院綠化樹種,在生態(tài)環(huán)境改善方面起著重要的作用,同時也是制作樂器的良好材料。泡桐在我國分布廣泛,然而土壤中的鹽濃度對泡桐分布有限制性作用。當?shù)叵滤贿^高,Ph>8.0,含鹽量大于0.05%則限制了泡桐在平原地區(qū)的分布。泡桐種子在發(fā)芽階段,有一定的耐鹽性,鹽漬度為1%時,其發(fā)芽率仍達到70%,當鹽漬度達1.6-2.5%時才沒有發(fā)芽,泡桐種根及實生苗的耐鹽在0.3%左右。我國的鹽漬土壤面積約占可耕地面積的1/4,因
2、此開發(fā)鹽堿土成為人類增加耕地面積的重要研究方向。本研究通過對愈傷組織進行誘變處理,旨在獲得能在高鹽環(huán)境中生長的泡桐突變體,為鹽堿地造林提供優(yōu)良的泡桐品種,同時也為泡桐雜交育種提供具有優(yōu)良抗性基因的親本。研究結(jié)果如下:
1、通過將豫雜一號泡桐愈傷組織與白花泡桐愈傷組織在不同濃度NaCl條件下培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)當愈傷組織生長環(huán)境中NaCl濃度大于0.6%時,豫雜一號泡桐愈傷組織不能生存:愈傷組織生長環(huán)境中NaCl濃度大于0.8%時,白
3、花泡桐愈傷組織全部死亡。因此對豫雜一號泡桐進行耐鹽突變體篩選的NaCl濃度為0.6%,對白花泡桐進行耐鹽突變體篩選的NaCl濃度為0.8%。利用誘變劑MMS對泡桐愈傷組織進行處理時,當MMS濃度為40mg/L,處理時間為1h時,豫雜一號泡桐愈傷組織存活率為43.3%,此為對豫雜一號泡桐愈傷組織進行誘變的半致死劑量。當MMS濃度為80mg/L,處理時間為4h時,愈傷組織存活率最為51.7%,此為對白花泡桐愈傷組織進行誘變的半致死劑量。
4、r> 2、選擇存活率接近50%的濃度時間組合為最佳誘變劑對兩種泡桐的愈傷組織進行誘變。以MMS濃度為40mg/L,處理時間為1h的誘變劑量對豫雜一號泡桐愈傷組織進行誘變處理,處理過的愈傷組織在NaCl濃度為0.6%的培養(yǎng)基上進行篩選,獲得分化的幼苗后將其在含致死濃度NaCl培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)5代,共獲得16株豫雜一號泡桐耐鹽突變體;以MMS濃度為80mg/L,處理時間為4h的誘變劑量對白花泡桐愈傷組織進行誘變處理,處理過的愈傷組織在
5、NaCl濃度為0.8%的培養(yǎng)基上進行篩選,對獲得幼苗經(jīng)過連續(xù)5代在含致死濃度NaCl培養(yǎng)基中進行篩選,共獲得10株豫雜一號泡桐耐鹽突變體。
3、利用泡桐SSR反應體系建立時所篩選的引物對16株豫雜一號泡桐耐鹽突變體及對照進行SSR-PCR擴增,電泳結(jié)果顯示只有6對引物在不同植株與對照之間表現(xiàn)出多態(tài)性。對篩選出來的10株白花泡桐耐鹽植株進行擴增,結(jié)果顯示僅有3對引物擴增出多態(tài)性。因此,SSR引物在豫雜一號泡桐和白花泡桐中檢測
6、出部分植株微衛(wèi)星序列發(fā)生了變異。利用NTSYS軟件對豫雜一號泡桐電泳結(jié)果進行聚類分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同的耐鹽植株與對照之間存在遺傳距離不同,其中15號植株和第9號植株與對照之間的遺傳距離較遠。
4、通過對泡桐原有的DNA提取方法進行改進,得到了適用于泡桐AFLP分析的DNA提取方法。利用篩選出來的97對引物對豫雜一號泡桐耐鹽植株進行了AFLP分析,結(jié)果表明,有16對引物在不同的植株中擴增出多態(tài)性位點。白花泡桐AFLP結(jié)果顯示有
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