免疫負調(diào)控基因IL-37和TIPE2在SLE患者的表達及其意義.pdf

1、目的:系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemiclupuserythematosus，SLE)是一種自身免疫性疾病，以體內(nèi)出現(xiàn)多種針對自身抗原的自身抗體和多系統(tǒng)受累為主要特點。免疫調(diào)節(jié)機制的功能異常是SLE發(fā)病的根本原因，其中促炎性細胞因子與抗炎性細胞因子的失衡發(fā)揮了重要作用。常見的促炎性細胞因子包括IL-12，IL-17，IL-6和TNF-α等，而抗炎性細胞因子如TGF-β等則相對較少。IL-37是新近發(fā)現(xiàn)的一種固有炎癥和免疫應(yīng)答的天然抑制物，

2、屬于IL-1家族。IL-37mRNA主要見于睪丸、胸腺和子宮，外周血單個核細胞和樹突狀細胞液可以通過誘導(dǎo)產(chǎn)生。IL-37在健康人群的基礎(chǔ)狀態(tài)下不表達，但在炎癥組織中高表達。盡管在免疫抑制劑、治療策略和新藥研發(fā)等發(fā)面取得了極大的發(fā)展，糖皮質(zhì)激素仍然是治療SLE的主要藥物。研究表明，糖皮質(zhì)激素可以抑制絕大多數(shù)細胞因子的表達和作用。然而，糖皮質(zhì)激素對SLE患者IL-37的作用目前尚未有報道。本研究通過檢測SLE患者血清及外周血單個核細胞中IL

3、-37，IL-18，IL-18BP,IL-6，IFN-γ和TGF-β等細胞因子的水平及表達，探討IL-37在SLE發(fā)病中的可能作用以及糖皮質(zhì)激素對SLE患者IL-37及其他細胞因子的影響。
　　 研究方法:
　　 1、患者
　　 入組20例新近診斷，且SLEDAI評分≥10的SLE患者，所有患者均給予強的松1mg/kgqd，連續(xù)應(yīng)用14天。SLE的診斷符合1997年美國風(fēng)濕病學(xué)院修訂的SLE分類標準。所有患者入組

4、前均未應(yīng)用過糖皮質(zhì)激素和其他免疫抑制劑。所有患者在應(yīng)用激素前及應(yīng)用激素2周后進行采血取樣。20例健康人群作為對照組。
　　 2、從PBMC提取RNA通過離心所有受試者的外周血獲得血清。通過梯度離心法提取單個核細胞。應(yīng)用Trizol提取總RNA。根據(jù)核酸蛋白儀確定RNA的數(shù)量并標準化到1μg/mL。
　　 3、ELISA法檢測細胞因子血清濃度采用ELISA法檢測血清IL-37、IL-18、IL-18BP、IFN-γ、IL-

5、6和TGF-β濃度。
　　 4、RT-PCR分析實時熒光定量RT-PCR檢測SLE患者和健康對照PBMCs中IL-37、IL-18、IL-18BP、IFN-γ、IL-6、TGF-β和內(nèi)源性對照(ACTB)mRNA的表達。
　　 結(jié)果:
　　 1、臨床特點
　　 入選SLE患者的男女之比為3∶17，平均病程為9.5±9.6個月，SLEDAI評分從治療前的14.7±4.0降低到治療后的12.8±3.1。

6、>　　 2、SLE患者的血清細胞因子改變
　　 與對照組相比，SLE患者所有被檢測的細胞因子包括IL-37、IL-18、IL-18BP、IFN-γ、IL-6和TGF-β均顯著升高(P＜0.05)。治療后SLE患者的IL-18、IL-18BP、IFN-γ和IL-6的血清水平與對照組相比無顯著差異。治療后SLE患者的IL-37(P＜0.05)和TGF-β(P＜0.05)水平仍顯著高于對照組。
　　 3、SLE患者的細胞因子

7、mRNA表達變化
　　 與對照組相比，治療前SLE患者IL-37mRNA的相對數(shù)量升高2.2倍(p＜0.01)，IL-18BP的mRNA表達沒有顯著性差異，IFN-γ的mRNA表達升高1.8倍(p＜0.01)。IL-18、IL-6和TGF-β的mRNA表達也分別叫對照組升高2.0倍、2.5倍和2.8倍(p＜0.01)。SLE患者所有6種細胞因子均較對照組升高。IL-18、IL-18BP、IFN-γ和IL-6的mRNA表達在治療后

8、SLE患者和對照組之間沒有顯著性差異。
　　 4、SLE患者IL-37與其他細胞因子的相關(guān)性
　　 我們的研究表明，糖皮質(zhì)激素治療前的SLE患者，其外周血血清IL-37濃度與IL-18(r=0.983,p＜0.01)、IL-18BP(r=0.985,p＜0.01)、IFN-γ(r=0.968,p＜0.01)、IL-6(r=0.980,p＜0.01)和TGF-β(r=0.969,p＜0.01)均顯著相關(guān)。經(jīng)過連續(xù)14天的強

9、的松治療后，IL-37的血清濃度仍然與IL-18(r=0.826,p＜0.01)、IL-18BP(r=0.833,p＜0.01)、IFN-γ(r=0.896,p＜0.01)、IL-6(r=0.853,p＜0.01)和TGF-β(r=0.944,p＜0.01)密切相關(guān)。IL-37濃度與SLEDAI評分在治療前(r=0.875，p＜0.01)和治療后(r=0.577，p＜0.01)均密切相關(guān)。
　　 5、糖皮質(zhì)激素對SLE患者細胞因

10、子血清水平及mRNA表達的影響
　　 SLE患者的IL-37(p=0.048)、IFN-γ(p=0.013)和TGF-β(p=0.028)在糖皮質(zhì)激素治療前后有顯著性差異。而IL-18、IL-18BP和IL-6在治療前后則無明顯差異。與治療前相比，治療后SLE患者的IL-37mRNA相對數(shù)量降低了40％(p＜0.01)，其他細胞因子包括IL-18、IL-6、IFN-γ和TGF-βmRNA表達也較治療前顯著降低。
　　 結(jié)