石椒草提取物對(duì)桔全爪螨和朱砂葉螨的生物活性及其作用機(jī)理研究.pdf

1、植食性螨類因其個(gè)體小、危害隱蔽而很難被發(fā)現(xiàn)，加之大量廣譜性殺蟲劑的應(yīng)用殺死了害螨天敵，致使螨類危害加重。目前螨類防治措施仍以化學(xué)防治為主，在殺死害螨的同時(shí)也污染了環(huán)境，破壞了生態(tài)平衡。隨著可持續(xù)農(nóng)業(yè)發(fā)展觀的興起，綠色環(huán)保型的植物源殺螨劑已是新農(nóng)藥研究開發(fā)的趨勢(shì)。本研究通過(guò)對(duì)15個(gè)科20種植物乙醇提取物對(duì)桔全爪螨(Panonychus citri McGregor)的觸殺活性測(cè)定，篩選出有較高生物活性的石椒草(Boenninghausen

2、ia sessilicarpa Levi.)，其后以石椒草為試材，桔全爪螨和朱砂葉螨[Tetanychus cinnabarinus(Boisduval)]為研究對(duì)象，較系統(tǒng)地研究了石椒草提取物對(duì)桔全爪螨和朱砂葉螨的生物活性及作用機(jī)理，并對(duì)其活性成分進(jìn)行初步的分離純化及生物活性檢測(cè)。獲得如下研究結(jié)果： 1、通過(guò)對(duì)15個(gè)科20種植物乙醇提取物對(duì)桔全爪螨成螨的觸殺活性測(cè)定，發(fā)現(xiàn)臭靈丹、石椒草、香茶菜和葎草提取物處理的螨校正死亡率均達(dá)

3、到80％以上，與其他提取物差異達(dá)到顯著水平，經(jīng)進(jìn)一步的生物活性測(cè)定表明石椒草提取物的殺螨活性最好，致死中濃度為0.9241 mg·ml<'-1>；通過(guò)對(duì)桔全爪螨螨卵和若螨生物活性測(cè)定表明，石椒草乙醇提取物對(duì)螨卵和若螨亦有較強(qiáng)的觸殺活性，其對(duì)卵、若螨的致死中濃度分別為1.7032 mg·ml<'-1>、0.7878mg·ml<'-1>。 2、本文采用了兩種提取程序?qū)κ凡葜械臍Ⅱ钚猿煞诌M(jìn)行提取。在觸殺活性測(cè)定中，通過(guò)玻片法發(fā)現(xiàn)：

4、在4種不同極性的有機(jī)溶劑(石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇)的梯度提取物中，以乙醇提取物和乙酸乙酯提取物的觸殺活性最強(qiáng)，當(dāng)提取物濃度為4mg·ml<'-1>時(shí)，24h對(duì)桔全爪螨的校正死亡率分別達(dá)到了94.68％、93.03％，明顯高于其他2種溶劑提取物。在平行提取中，以乙醇提取物的觸殺活性最強(qiáng)，當(dāng)提取物濃度為4mg·ml<'-1>時(shí)，24h對(duì)桔全爪螨的校正死亡率達(dá)到了91.67％，而乙酸乙酯提取物則為54.19％，說(shuō)明乙醇是石椒草殺螨活性物

5、質(zhì)的最佳提取溶媒。 3、采用3種生物測(cè)定方法(玻片浸漬法、噴霧法、內(nèi)吸作用)研究石椒草乙醇提取物對(duì)桔全爪螨成螨的生物活性。表明玻片浸漬法效果最好，校正死亡率為92.31％；噴霧法次之，為82.05％；內(nèi)吸作用最差，為6.67％；說(shuō)明石椒草提取物主要以觸殺作用方式為主。 4、石椒草乙醇提取物經(jīng)萃取，以水的萃取率最高，達(dá)到了50.66％，氯仿和石油醚次之，分別為24.74％和18.17％，乙酸乙酯的萃取率最低，僅為5.79％

6、。4種萃取物經(jīng)觸殺活性測(cè)定，以乙酸乙酯層觸殺活性最強(qiáng)，對(duì)桔全爪螨成螨、若螨和卵的I.,C50分別為0.7639mg·ml<'-1>、0.3226 mg·ml<'-1>和1.1033 mg·ml<'-1>；對(duì)朱砂葉螨成螨、若螨和卵的L,C50分別為1.0113 mg·ml<'-1>、0.8451 mg·ml<'-1>和1.5652 mg·ml<'-1>。石油醚層對(duì)桔全爪螨和朱砂葉螨的LC<,50>分別為3.4930 mg·ml<'-1>和

7、3.2762 mg·ml<'-1>，氯仿層分別為1.4951mg·ml<'-1>、2.1010mg·ml<'-1>，水相分別為3.8843mg·ml<'-1>和4.7940 mg·ml<'-1>。 5、乙酸乙酯萃取物經(jīng)柱層析分離后，經(jīng)TLC檢驗(yàn)，合并相同成分，得14個(gè)組分，再經(jīng)殺螨殺卵生物活性測(cè)定，組分2的生物活性最強(qiáng)，對(duì)桔全爪螨和朱砂葉螨成螨的LC<,50>分別為0.2662 mg·ml<'-1>、0.1897mg·ml<'-

8、1>。 6、用葉碟法測(cè)試了流分2對(duì)桔全爪螨生長(zhǎng)發(fā)育影響，結(jié)果表明組分2能抑制桔全爪螨發(fā)育，而且濃度越高，抑制作用越強(qiáng)烈，當(dāng)濃度為1mg·ml<'-1>和0.5 mg·ml<'-1>時(shí)抑制作用很明顯，6d后卵孵化率分別為O％、5.28％，對(duì)照為55.13％。對(duì)雌成螨的繁殖力影響也表明：乙醇提取物和流分2具有明顯的產(chǎn)卵抑制作用，這種作用隨著濃度的降低而降低，濃度為2.5 mg·ml<'-1>時(shí)，12h和24h產(chǎn)卵抑制指數(shù)分別為0.7

9、850、0.6816；當(dāng)濃度為0.5mg·ml<'-1>時(shí)，產(chǎn)卵抑制指數(shù)皆為0。 7、初步的作用機(jī)理表明：石椒草提取物對(duì)桔全爪螨體內(nèi)的蛋白質(zhì)有顯著的抑制作用；對(duì)其體內(nèi)的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶有激活的作用；對(duì)羧酸酯酶有明顯的抑制作用：而過(guò)氧化物酶的活性與對(duì)照接近，說(shuō)明其對(duì)桔全爪螨體內(nèi)的過(guò)氧化物酶抑制作用不顯著。 本研究在對(duì)20種植物乙醇提取物對(duì)桔全爪螨觸殺活性的基礎(chǔ)上，篩選出殺螨活性高的石椒草，對(duì)石椒草殺螨活性成分進(jìn)行了萃取